副腎低形成症をきたす新規責任遺伝子異常を有する疾患モデルマウスの作製と病態解明

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K08260
• Research Institution: Keio University
• Principal Investigator: 天野 直子 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 共同研究員 (70348689)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 高田 修治 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, システム発生・再生医学研究部, 部長 (20382856)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: 副腎低形成 / モデルマウス

Outline of Annual Research Achievements

先天性副腎低形成症を有する3症例において遺伝子A内の特定領域に微細欠失を同定した。本研究課題では、この遺伝子Aの特定領域を欠失した疾患モデルマウス（副腎低形成を想定）を作製する。作製した疾患モデルマウスの表現型、罹患組織（副腎・性腺）を病理組織学的および分子生物学的に解析し、遺伝子Aの副腎皮質発生・分化における役割および特定領域欠失による副腎皮質発生・分化障害のメカニズムを明らかにすることを目標としている。
当該年度に遺伝子Aのエクソン2を欠失したマウスを作製した。はじめに、マウス受精卵へゲノム編集（マウス系統はBDF1）を行った。具体的には遺伝子 Aエクソン2の上流下流のおのおの100bps以上離れた領域を切断するgRNAを作製し、マウス受精卵（2細胞期）の1細胞のみにこのgRNAとCas9 protein をmicroinjectionした。出生した新生仔のうちエクソン2欠失を有するマウス（ここでは体細胞モザイク）のみ選択した。その後、野生型C57BL/6マウスとエクソン2を体細胞モザイクで有するマウスを交配し、生殖細胞系列にエクソン2欠失をヘテロ接合性に有するマウス（ヘテロ欠失マウス）を作製した。このエクソン2ヘテロ欠失マウスは、雄雌ともに妊孕性があり、長期生存可能であった。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

初年度の予定であった生殖細胞系列に遺伝子Aエクソン2欠失をヘテロ接合性に有するマウス（ヘテロ欠失マウス）の作製に成功した。ただし、作製したマウスは無介入で長期生存可能であり、想定した表現型（副腎不全を疑わせる症状）を認めなかった。

Strategy for Future Research Activity

遺伝子Aエクソン2ヘテロ欠失マウスに想定した表現型が出なかったため、次年度では遺伝子Aエクソン2ヘテロ欠失マウス同士を交配し、遺伝子Aエクソン2ホモ欠失マウス（ホモ欠失マウス）を作製する。マウス作製後には、まずホモ欠失マウスのmRNAをシークエンスし、mRNAレベルでエクソン2が欠失していることを確認する。作製したホモ欠失マウスについて表現型解析、病理組織学的解析等を行う予定である。

Causes of Carryover

当該助成金が1900円と端数であったため使用困難であった。来年度の物品費に加算して使用する。