2020 Fiscal Year Research-status Report
Development of gene therapy for congenital adrenal hyperplasia using AAV vectors and iPS cells
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19K08359
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| Research Institution | National Center for Child Health and Development |
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Principal Investigator |
内木 康博 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 内科系専門診療部, 医師 (20470007)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
勝又 規行 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 分子内分泌研究部, 室長 (10260340)
深見 真紀 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 分子内分泌研究部, 部長 (40265872)
阿久津 英憲 国立研究開発法人国立成育医療研究センター, 生殖医療研究部, 部長 (50347225)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 副腎皮質過形成症 / 遺伝子治療 / iPS細胞 / SF1 / CYP21A2 / CYP11B1 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
副腎皮質過形成症は副腎のステロイド合成酵素の異常によって生じる常染色体劣性遺伝の疾患で新生児マススクリーニング対象疾患である。本研究の目的は副腎皮質過形成症に対する遺伝子治療モデルの確立である。
昨年度までに11β水酸化酵素欠損症患者から得られた線維芽細胞からiPS細胞(11βOHD-iPSC)を作成し、ステロイド酵素転写因子(SF1)とGFPを共発現できるレンチウィルスベクターを作成した。本研究期間では当初の計画通りに作成した11βOHD-iPSCとコントロールのiPS細胞に対してレンチウィルスベクターを用いてSF1遺伝子を導入することで副腎皮質細胞へ分化させる実験を行った。SF1遺伝子を導入した後にレチノイン酸を添加した培地で細胞を培養した。細胞数が充分に増えるまで培養を継続し、かつGFPの蛍光発光をもって遺伝子発現の持続を確認した。細胞数が充分に増えた後に、cAMPを添加した培地に変更して3日間培養した。この後にRT-PCRを用いて遺伝子発現を確認したところコントロールのiPSCではCYP21A2遺伝子とCYP11B1遺伝子の発現を確認、11βOHD-iPSCにおいてはCYP21A2遺伝子の発現を確認し、線維芽細胞由来のiPCS細胞が副腎皮質細胞へ分化が成功したことを証明した。
また次の実験計画に用いるCYP11B1遺伝子を含んだ血清型9型のAAVベクター(AAV9-CYP11B1)を作成した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は昨年度に作成した副腎皮質過形成症患者由来のiPS細胞とSF1遺伝子を含んだレンチウィルスベクターを用いてiPS細胞を副腎皮質細胞へ分化させる計画でほぼ計画通りに実験が進められた。
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| Strategy for Future Research Activity |
令和3年度において11βOHD-iPSCとSF1遺伝子を用いて作成した副腎皮質細胞をモデル副腎としてAAV9-CYP11B1を用いて遺伝子導入し遺伝子治療モデルを作成し有効性を確認する計画である。
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| Causes of Carryover |
内木の分は実験計画が順調に進んだことにより再実験用としてとってあった試薬代が未使用になったためであり、勝又の分は国内学会が全てオンラインになったことから予定していた旅費が未使用になったため次年度使用残高が発生した。
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