2019 Fiscal Year Research-status Report
STEAP1を介した酸化ストレス制御による新規肝細胞癌治療法の開発
| Project/Area Number |
19K08397
|
|---|
| Research Institution | Sapporo Medical University |
|---|
Principal Investigator |
高田 弘一 札幌医科大学, 医学部, 講師 (90398321)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
中村 元 札幌医科大学, 医学部, 研究員 (10792666) [Withdrawn]
加藤 淳二 札幌医科大学, 医学部, 教授 (20244345)
宮西 浩嗣 札幌医科大学, 医学部, 准教授 (60372819)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
|
| Keywords | STEAP1 / 肝細胞癌 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
これまで報告されていないSTEAP1/NRF2シグナル経路による酸化ストレス制御機構を解析し，新規HCC治療法開発を目指している．以下に具体的な研究実績を示す．
① HCCにおけるSTEAP1の発現解析；STEAP1発現がHCC患者の予後に与える影響をGSE14520を用いて解析した．STEAP1高発現群は有意に予後不良であり，さらに非癌部に比べて癌部でSTEAP1の発現が高値であることを明らかにした．② loss-of-function analysisによるSTEAP1の機能解析；HCC細胞株にsiRNAを用いてSTEAP1をKDし，cell viabilityをWST-1 assayで評価したところ，細胞増殖の抑制が観察された．apoptosisをAnnexinV/7AADを用いたflow cytometerで解析したところ，有意なapoptosis増加は認められなかったが、Propidium Iodide によるcell cycle analysisの結果，G1 arrestが惹起されていることが明らかとなった．③ STEAP1による酸化ストレス制御ネットワークの解析；GSE14520(GPL3921）のpublic dataをGEO2Rを用いて，STEAP1の高発現群10%と低発現群10%において，differentially expressed genes (DEG)を検討。Cut-off値をadj.P value < 0.05 かつ |logFC|>2とし，Volcano plotを作成した．これらのDEGに関して，GEPIAを用いてTCGAのデータセットにアクセスし，STEAP1発現と有意な正の相関が認められる遺伝子の抽出を行った．その結果，C9,GPX2,c-Myc,ROBO1であった．はじめにc-MycについてqPCRで検討した．残念ながらSTEAP1 K/Dによってc-Mycの発現量低下は認められなかった．
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
STEAP1の発現が，肝細胞癌では有意に亢進しており，かつSTEAP1高発現群が有意に予後が不良であることを見出している．さらに，si-STEAP1-RNAの評価も終了済である．STEAP K/Dによりcell cycle arrestが観察されることを新たに見出している．今後、STEAP1 K/D がROSに与える影響を解析中であり，当該研究は計画通り進んでいる．
|
| Strategy for Future Research Activity |
STEAP1 K/D がNRF2に与える影響をqPCRおよび細胞免疫染色で検討する．一方，lenvatinib感受性にSTEAP1が関連しているか否かをlenvatinib耐性HCC細胞株を樹立して検討予定である．前述の検討を in vivoでも解析していく．
|
| Causes of Carryover |
複数のsi-RNA (STEAP1)を複数の肝細胞癌細胞株を用いて条件設定を行っていたため、PCR arrayおよびmicroarrayによるSTEAP1シグナル伝達経路の網羅的解析を中断していたため。令和２年度に同解析を進めていく。
|
