2021 Fiscal Year Research-status Report
肝癌感受性遺伝子MICAのシェダーゼ阻害を基盤とした新規治療薬の探索
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19K08412
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| Research Institution | Chiba Prefectural University of Health Sciences |
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Principal Investigator |
太和田 暁之 千葉県立保健医療大学, 健康科学部, 教授 (10596159)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
荒井 潤 昭和大学, 医学部, 講師 (30766176)
室山 良介 千葉大学, 大学院医学研究院, 助教 (50549459)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 肝細胞癌 / MICA / 大規模化合物ライブラリ / シェダ－ぜ阻害薬 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
・レポーターシステム(R&D systems社)による阻害薬スクリーニングを行う.
・新規候補薬のシェダーゼ阻害効果の確認とMICAの評価：肝癌細胞株を, ヒットした化合物(以下「新規候補薬」)で処理しシェダーゼの阻害効果およびMICAの切断回避効果を1, シェダーゼmRNAおよび蛋白, 2. 培養上清中の可溶型MICA蛋白および膜型MICA発現量, でそれぞれ評価をする.新規候補薬の濃度を対数でふった系で濃度依存性の評価を行う.
・In vitro自然免疫モデルによる新規候補薬の抗腫瘍効果の評価： 肝癌細胞株とNK細胞株との共培養の実験系をin vitro自然免疫モデルとして確立した(Goto et al. Sci Rep. 2017). 肝癌細胞株を新規候補薬で処理したのちNK細胞株と共培養し, 上清中のLDHを肝癌細胞株障害の指標として測定する.
・腫瘍移植マウスを用いた新規候補薬の腫瘍縮小効果の評価： 肝癌細胞株を超免疫不全マウスNSGに皮下注射し(1×106個/個体), 正常ドナーマウスからNK細胞を経静脈的に移植(2×106個/個体)する. 1. DMSO(陰性対照), 2. 新規候補薬, 3. 抗NKG2D抗体(1mg/kg, 陽性対照), 4. 新規候補薬および抗NKG2D抗体(シェダーゼ阻害効果のキャンセル実験)を投与し0-24日目まであらかじめ定めた経過日に, 生着した腫瘍径を計測する.
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
研究代表者の所属施設の異動により実験の実施が遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
・レポーターシステム(R&D systems社)による阻害薬スクリーニングを行う.
・新規候補薬のシェダーゼ阻害効果の確認とMICAの評価：肝癌細胞株を, ヒットした化合物(以下「新規候補薬」)で処理しシェダーゼの阻害効果およびMICAの切断回避効果を1, シェダーゼmRNAおよび蛋白, 2. 培養上清中の可溶型MICA蛋白および膜型MICA発現量, でそれぞれ評価をする.新規候補薬の濃度を対数でふった系で濃度依存性の評価を行う.
・In vitro自然免疫モデルによる新規候補薬の抗腫瘍効果の評価： 肝癌細胞株とNK細胞株との共培養の実験系をin vitro自然免疫モデルとして確立した(Goto et al. Sci Rep. 2017). 肝癌細胞株を新規候補薬で処理したのちNK細胞株と共培養し, 上清中のLDHを肝癌細胞株障害の指標として測定する.
・腫瘍移植マウスを用いた新規候補薬の腫瘍縮小効果の評価： 肝癌細胞株を超免疫不全マウスNSGに皮下注射し(1×106個/個体), 正常ドナーマウスからNK細胞を経静脈的に移植(2×106個/個体)する. 1. DMSO(陰性対照), 2. 新規候補薬, 3. 抗NKG2D抗体(1mg/kg, 陽性対照), 4. 新規候補薬および抗NKG2D抗体(シェダーゼ阻害効果のキャンセル実験)を投与し0-24日目まであらかじめ定めた経過日に, 生着した腫瘍径を計測する.
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| Causes of Carryover |
当該年度に、予定していた実験の一部が実施できなかった。余剰した額はこの実験に充てる予定であったものである。次年度にこの実験を実施する予定であるため「余剰した額」=「次年度使用額」を本実験に充てる(研究代表者が実施する予定であり研究分担者は実施の予定はない)。分担研究者については端数が生じたことによる。
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