2022 Fiscal Year Research-status Report

肝癌感受性遺伝子MICAのシェダーゼ阻害を基盤とした新規治療薬の探索

Research Project

Project/Area Number	19K08412
Research Institution	Chiba Prefectural University of Health Sciences
Principal Investigator	太和田暁之千葉県立保健医療大学, 健康科学部, 教授 (10596159)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	荒井潤昭和大学, 医学部, 講師 (30766176) 室山良介千葉大学, 大学院医学研究院, 助教 (50549459)
Project Period (FY)	2019-04-01 – 2024-03-31
Keywords	肝細胞癌 / MICA / 大規模化合物ライブラリ / シェダーゼ阻害薬
Outline of Annual Research Achievements	・レポーターシステム(R&D systems社)による阻害薬スクリーニングを行う. ・新規候補薬のシェダーゼ阻害効果の確認とMICAの評価：肝癌細胞株を, ヒットした化合物(以下「新規候補薬」)で処理しシェダーゼの阻害効果およびMICAの切断回避効果を1. シェダーゼmRNAおよび蛋白, 2. 培養上清中の可溶型MICA蛋白および膜型MICA発現量, でそれぞれ評価をする.新規候補薬の濃度を対数でふった系で濃度依存性の評価を行う. ・In vitro自然免疫モデルによる新規候補薬の抗腫瘍効果の評価：肝癌細胞株とNK細胞株との共培養の実験系をin vitro自然免疫モデルとして確立した(Goto et al. Sci Rep. 2017). 肝癌細胞株を新規候補薬で処理したのちNK細胞株と共培養し, 上清中のLDHを肝癌細胞株障害の指標として測定する. ・腫瘍移植マウスを用いた新規候補薬の腫瘍縮小効果の評価：肝癌細胞株を超免疫不全マウスNSGに皮下注射し(1×106個/個体), 正常ドナーマウスからNK細胞を経静脈的に移植(2×106個/個体)する. 1. DMSO(陰性対照), 2. 新規候補薬, 3. 抗NKG2D抗体(1mg/kg, 陽性対照), 4. 新規候補薬および抗NKG2D抗体(シェダーゼ阻害効果のキャンセル実験)を投与し0-24日目まであらかじめ定めた経過日に, 生着した腫瘍径を計測する.
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 4: Progress in research has been delayed. Reason 研究代表者の所属施設の異動により実験の実施が遅れている。
Strategy for Future Research Activity	・レポーターシステム(R&D systems社)による阻害薬スクリーニングを行う. ・新規候補薬のシェダーゼ阻害効果の確認とMICAの評価：肝癌細胞株を, ヒットした化合物(以下「新規候補薬」)で処理しシェダーゼの阻害効果およびMICAの切断回避効果を1, シェダーゼmRNAおよび蛋白, 2. 培養上清中の可溶型MICA蛋白および膜型MICA発現量, でそれぞれ評価をする.新規候補薬の濃度を対数でふった系で濃度依存性の評価を行う. ・In vitro自然免疫モデルによる新規候補薬の抗腫瘍効果の評価：肝癌細胞株とNK細胞株との共培養の実験系をin vitro自然免疫モデルとして確立した(Goto et al. Sci Rep. 2017). 肝癌細胞株を新規候補薬で処理したのちNK細胞株と共培養し, 上清中のLDHを肝癌細胞株障害の指標として測定する. ・腫瘍移植マウスを用いた新規候補薬の腫瘍縮小効果の評価：肝癌細胞株を超免疫不全マウスNSGに皮下注射し(1×106個/個体), 正常ドナーマウスからNK細胞を経静脈的に移植(2×106個/個体)する. 1. DMSO(陰性対照), 2. 新規候補薬, 3. 抗NKG2D抗体(1mg/kg, 陽性対照), 4. 新規候補薬および抗NKG2D抗体(シェダーゼ阻害効果のキャンセル実験)を投与し0-24日目まであらかじめ定めた経過日に, 生着した腫瘍径を計測する.
Causes of Carryover	当該年度に、予定していた実験の一部が実施できなかった。余剰した額はこの実験に充てる予定であったものである。次年度にこの実験を実施する予定であるため「余剰した額」=「次年度使用額」を本実験に充てる。