肝癌感受性遺伝子MICAのシェダーゼ阻害を基盤とした新規治療薬の探索

2023 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19K08412
• Research Institution: Chiba Prefectural University of Health Sciences
• Principal Investigator: 太和田 暁之 千葉県立保健医療大学, 健康科学部, 教授 (10596159)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 荒井 潤 昭和大学, 医学部, 講師 (30766176) ; 室山 良介 千葉大学, 大学院医学研究院, 助教 (50549459)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: MICA / シェダーゼ阻害 / 肝細胞癌

Outline of Annual Research Achievements

・レポーターシステム(R&D systems社)による阻害薬スクリーニングを行う.
・新規候補薬のシェダーゼ阻害効果の確認とMICAの評価：肝癌細胞株を, ヒットした化合物(以下「新規候補薬」)で処理しシェダーゼの阻害効果およびMICAの切断回避効果を1, シェダーゼmRNAおよび蛋白, 2. 培養上清中の可溶型MICA蛋白および膜型MICA発現量, でそれぞれ評価をする.新規候補薬の濃度を対数でふった系で濃度依存性の評価を行う.
・In vitro自然免疫モデルによる新規候補薬の抗腫瘍効果の評価： 肝癌細胞株とNK細胞株との共培養の実験系をin vitro自然免疫モデルとして確立した(Goto et al. Sci Rep. 2017). 肝癌細胞株を新規候補薬で処理したのちNK細胞株と共培養し, 上清中のLDHを肝癌細胞株障害の指標として測定する.
・腫瘍移植マウスを用いた新規候補薬の腫瘍縮小効果の評価： 肝癌細胞株を超免疫不全マウスNSGに皮下注射し(1×106個/個体), 正常ドナーマウスからNK細胞を経静脈的に移植(2×106個/個体)する. 1. DMSO(陰性対照), 2. 新規候補薬, 3. 抗NKG2D抗体(1mg/kg, 陽性対照), 4. 新規候補薬および抗NKG2D抗体(シェダーゼ阻害効果のキャンセル実験)を投与し0-24日目まであらかじめ定めた経過日に, 生着した腫瘍径を計測する.