ピロリ菌病原因子CagAの宿主細胞内新規結合ホスファターゼの解析

2021 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19K08436
• Research Institution: Asahikawa Medical College
• Principal Investigator: 藤井 裕美子 旭川医科大学, 医学部, 助教 (30722334)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: 脂質ホスファターゼ

Outline of Annual Research Achievements

昨年度までに、ピロリ菌病原因子CagAのチロシンリン酸化依存的な新規結合標的として脂質ホスファターゼSHIP2を同定し、CagAが宿主細胞において細胞膜近傍でSHIP2の酵素活性を亢進することにより、ピロリ菌が接着した細胞膜のホスファチジルイノシトール組成を変化させ、ピロリ菌から宿主細胞内へのCagAの取り込みを亢進することを明らかにしてきた。SHIP2と腫瘍との直接的な関係を調べるため、肝がん患者の手術検体においてSHIP2を免疫組織化学的に解析したところ、SHIP2は肝細胞がんでは細胞膜近傍に集積していたのに対し、多くの肝内胆管がんでは細胞核に集積していた。非がん部の肝内胆管細胞の一部でもSHIP2が核に集積していたことから、非腫瘍性肝内胆管細胞株MMNK-1においてSHIP2の局在を免疫蛍光法で解析したところ、細胞の核内にもSHIP2が存在することが確認され、さらに分裂期の細胞で染色体の周辺部に特異的なSHIP2局在が観察された。SHIP2が肝内胆管細胞の核内で果たす役割について解析するため、MMNK-1細胞をもとにCRISPR-Cas9システムを用いてSHIP2ノックアウト細胞株を樹立した。DNA障害を検出するリン酸化ヒストンH2A.Xに対する蛍光免疫染色を行ったところ、SHIP2の欠損によりリン酸化ヒストンH2A.X陽性細胞が増加することが明らかになった。SHIP2阻害剤の処理によってもリン酸化ヒストンH2A.X 陽性細胞の増加が観察されたことから、SHIP2はそのホスファターゼ活性依存的に肝内胆管細胞の染色体およびゲノムの安定性に寄与することが示唆され、この機能の異常が、がんの発生や悪性化に関与する可能性が考えられた。