2020 Fiscal Year Research-status Report
HBV HBxタンパクのユニークな転写制御機構を標的とした抗HBV化合物の探索
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19K08439
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| Research Institution | University of Yamanashi |
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Principal Investigator |
山下 篤哉 山梨大学, 大学院総合研究部, 助教 (00334871)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | HBV / HBx / cccDNA / 抗ウイルス化合物 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
研究代表者らは、先行研究を基にEBウイルスのエピゾーマルベクターシステムを用いたHBｘ抑制化合物のスクリーニング系の構築を試みてきた。昨年度は、一昨年度に引き続きHBVコアプロモーター・エピゾーマル・レポーター細胞株の樹立を行い、HBｘの発現により、その活性が10倍以上に上がるような系の樹立を目指した。具体的には、4-ヒドロキシタモキシフェン処理により、HBｘの発現をONにすることが出来るERT2iCre-loxPシステムを用いたHBｘ発現HepG2細胞を樹立した（ERT2iCre-loxP HBｘHepG2細胞）。更に、ERT2iCre-loxP HBｘHepG2細胞にHBVコアプロモーター・エピゾーマル・レポーターベクターを移入し、安定発現細胞株を100クローン以上樹立した。しかし、いずれも誘導時にはHBｘは高発現するものの顕著なルシフェラーゼ活性の上昇は確認出来ず、現在までレポーター細胞の樹立には至っていない。ただし、研究開始後1年半を以上経過した段階において、抑制化合物のスクリーニング系として使える状態までに至らなかったため、EBウイルスのエピゾーマルベクターシステムを用いたスクリーニング系の構築をしつつ、新たなHBｘの働きを抑制出来る化合物のスクリーニング系の構築の検討も開始した。具体的には、HBVcccDNAの転写活性をモニターすることでHBxの働きを検出出来る幾つかのシステムについて構築中である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
申請書で計画したEBウイルスのエピゾーマルベクターシステムを用いたHBｘ抑制化合物のスクリーニング系の構築は、研究を開始してから1年半を過ぎても確立出来ず、新たなスクリーニング系の確立が必要となったため、当初の計画から遅れている。
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| Strategy for Future Research Activity |
昨年から、HBVcccDNAの転写活性をモニターすることでHBxの働きを検出出来る幾つかのシステムの構築に着手した。今年度はHBxの働きを抑制出来る化合物のスクリーニング系の構築を確立し、抑制化合物の探索に着手することを目指したい。
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[Journal Article] Deep sequencing analysis of serum hepatitis B virus-RNA during nucleot(s)ide analogue therapy2021
Author(s)
Shuya Matsuda, Shinya Maekawa, Yasuyuki Komiyama, Natsuko Nakakuki, Tatsuya Yamaguchi, Yasuhiro Nakayama, Taisuke Inoue, Tadashi Sato, Atsuya Yamashita, Kohji Moriishi, Nobuyuki Enomoto
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Journal Title
Hepatology Research
Volume: 51
Pages: 39-50
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Cancer-related genetic changes in multistep hepatocarcinogenesis and their correlation with imaging and histological findings2020
Author(s)
Masaru Muraoka, Shinya Maekawa, Yuichiro Suzuki , Mitsuaki Sato, Tatsuya Yamaguchi, Taisuke Inoue, Tadashi Sato, Atsuya Yamashita, Kohji Moriishi, Masanori Matsuda, Nobuyuki Enomoto
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Journal Title
Hepatology Research
Volume: 50
Pages: 1071-1082
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Establishment of a Cell Culture Model Permissive for Infection by Hepatitis B and C Viruses2020
Author(s)
Teruhime Otoguro, Tomohisa Tanaka, Hirotake Kasai, Nobuhiro Kobayashi, Atsuya Yamashita, Takasuke Fukuhara, Akihide Ryo, Moto Fukai, Akinobu Taketomi, Yoshiharu Matsuura, Kohji Moriishi
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Journal Title
Hepatology Communications
Volume: 5
Pages: 634-649
DOI
Peer Reviewed / Open Access
