2021 Fiscal Year Research-status Report
NSAIDs起因性小腸傷害における好中球細胞外トラップの役割と診断・治療法確立
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19K08474
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| Research Institution | Osaka City University |
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Principal Investigator |
渡邉 俊雄 大阪市立大学, 大学院医学研究科, 教授 (50336773)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
灘谷 祐二 大阪市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (00634007)
大谷 恒史 大阪市立大学, 大学院医学研究科, 講師 (30597555)
谷川 徹也 大阪市立大学, 大学院医学研究科, 客員准教授 (70423879)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | NSAIDs |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでの検討において、インドメタシン起因性小腸傷害は好中球依存的であること、蛍光2重免疫染色法を用いて本傷害において好中球細胞外トラップ(neutrophil extracellular traps: NETs）が形成されていることを確認した。また、NETs発現動態をウエスタンブロッティング法で検討した。NETsは抗シトルリン化ヒストンH3 (Cit-H3)を含む細胞外DNA成分として同定されるため、抗Cit-H3抗体を用いた。インドメタシン投与3、6、12、24時間後に屠殺して採取した小腸組織において、6時間をピークにNETsの発現が亢進していることが判明した。 次に本傷害におけるNETsの役割解析を行った。PAD4阻害薬であるCl-amidineおよびStreptonigrinを投与しNETs抑制することにより、本傷害がCl-amidine投与群で27％、streptonigrin投与群で52％軽減することを確認した。これらの結果より本傷害においてNETs形成が傷害促進的の働いている可能性が示唆された。
本年度は昨年までの検討に加えて、Jackson labからB6.Cg-Padi4<tml.Kmow>/J （PAD4 KOマウス）の凍結胚を購入し個体復元を行った。このPAD3 KOマウスに対してNSAIDS起因性小腸傷害を作成したところ、肉眼的にも分子生物学的にもNSAIDS起因性小腸傷害の改善をみとめ、PAD4を介した経路でNETsがNSAIDS起因性小腸傷害の悪化因子であることがあきらかになった。また、Cell Free DNAの測定も行い、NSAIDS起因性小腸傷害の形成とともに、血中Cell Free DNAの濃度が上昇することも明らかとなり仮説を証明する物であった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
新型コロナウイルスの流行に伴い、マウスの輸入や試薬購入に対してタイムラグが生じたため。
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| Strategy for Future Research Activity |
今までの検討に加えて、NETs形成の抑制が、傷害の程度だけでなく、炎症性サイトカインやNLRP3インフラマソームの発現や活性化に及ぼす影響を検討するための検討を追加する。
本年度、一部の実験系で、実験結果としてcell-free DNAのELISA法測定を行ったが、まだ測定できていない実験でも測定を追加する。
ノックアウトマウスでの検討をおこなっているが、導入が予定よりも遅延した影響で現時点で実験結果は不充分であるため、検討を追加する。また、MPOの計測に関しては、計測不能であったため、キットの不具合を疑い再度計測する予定である。
免疫組織染色についても、一部うまく染色できているが、ノンスペシフィックな染色が多いため、追加の抗体での染色を追加する予定で、発注済みである。
NSAIDs服用関節リウマチ患者の血中抗シトルリン化蛋白（抗CCP）抗体の有無（または抗体価）と、カプセル内視鏡で評価した小腸傷害重症度との相関を検討するために症例を蓄積する。
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| Causes of Carryover |
新型コロナウイルスの流行にともない、一部の実験が遅延しているため。
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