新規昇圧物質CF6の内因性阻害物質の同定と創薬への応用

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K08573
• Research Institution: Hirosaki Gakuin University
• Principal Investigator: 田中 真実 弘前学院大学, 看護学部, 准教授 (10720873)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 長内 智宏 弘前大学, 保健学研究科, 教授 (00169278) [Withdrawn]
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: プロスタサイクリン / アラキドン酸 / 高血圧 / 糖尿病 / Coupling factor 6 (CF6)

Outline of Annual Research Achievements

Coupling factor 6(CF6) がプロスタサイクリンの産生を阻害する内因性ペプチドであることを発見した。CF6はF1分子モーターを活性化しプロスタサイクリン産生の抑制、食塩感受性高血圧ならびに糖尿病の発症を引き起こす。このF1分子モーターを阻害する物質としてInhibitory protein IF1が最近同定されたが、IF1はF1分子モーターを阻害し、CF6の作用は阻害するがミトコンドリアのATP合成には全く影響を与えず、CF6の特異的阻害物質として作用する可能性が極めて大きい。以上のことを背景に、IF1の抗CF6作用の有無について培養細胞とCF6過剰発現マウスから採取した線維芽細胞（TG細胞）を用いて検討した。
これまでの研究では、CF6のプロスタサイクリン産生抑制作用に及ぼす影響を明らかにした。TG 細胞にIF1-cDNAをtransfection しIF1過剰発現後の細胞膜を3Hアラキドン酸でラベル後、30分間に放出される3Hアラキドン酸を測定した。その結果、TG細胞からのアラキドン酸遊離はWT細胞に比して有意に減少していた。IF1の過剰発現により、WT細胞からのアラキドン酸遊離は変化しなかったが、TG細胞では有意に増加がみられた。すなわち、TG細胞に認められたプロスタサイクリン産生低下は、IF1の発現により回復が認められた。更に、CF6は食塩感受性高血圧ならびに糖尿病の発症を引き起こすことから、今後細胞を培養し培養液中のNOを測定する必要があると思われた。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

2021年度は以下の通りであった。
CF6はF1分子モーターを活性化しプロスタサイクリン産生の抑制、食塩感受性高血圧ならびに糖尿病の発症を引き起こす。CF6過剰発現マウスにおける食塩感受性高血圧の発症とインスリン抵抗性に関連する分子に及ぼす影響をTG細胞を用いて観察する目的で、CF6過剰発現マウスから採取したTG細胞にIF1過剰発現させ、培養後の培養液上清を冷凍保存した。
新型コロナウイルス禍の為、動物実験施設及び細胞培養室がある弘前大学大学院医学研究科へ思うように行くことが出来ず研究成果は遅れていると判断した。

Strategy for Future Research Activity

2022年度は、CF6過剰発現マウスにおける食塩感受性高血圧の発症とインスリン抵抗性に関連する分子に及ぼす影響を観察する目的で、現在保存している、IF1過剰発現TG細胞培養上清液中のNO産生量を測定する。更に、IF1過剰発現TG細胞をアセチルコリンで刺激し、培養上清液中のNOを測定する。IF1がCF6を阻害しNO産生を亢進することを明らかにする。

Causes of Carryover

新型コロナウイルスの影響で、細胞培養室および動物実験施設がある弘前大学大学院医学研究科へ思うように行くことが出来なかった。