創薬のための統合オミックス解析による難治性ネフローゼの病因・病態探索

2021 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19K08686
• Research Institution: Kyorin University
• Principal Investigator: 楊 國昌 杏林大学, 医学部, 客員教授 (70255389)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 清水 章 日本医科大学, 大学院医学研究科, 大学院教授 (00256942) ; 田中 絵里子 杏林大学, 医学部, 講師 (80439827)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: ポドサイト / ケモカイン / ネフローゼ

Outline of Annual Research Achievements

前年度に、胸腺ライブラリーを対象とした酵母ツーハイブリッド法によりCCケモカイン（X）が、Crb2の結合分子である可能性を得た。そこで、Crb2発現HEK細胞株にCCケモカイン（X）を導入し免疫沈降を行ったところ、両分子の結合性が証明された。2重免疫染色により、Crb2細胞株の細胞膜上にCCケモカイン（X）が同局在することが観察された。この両分子の結合は、シアル酸を介することが判明した。Crb2発現HEK細胞とCrb2発現マウスポドサイト細胞株にリコンビナントCCケモカイン（X）を反応させ、ezrinおよびアクチンの変化について、それぞれの宿主細胞と比較した。その結果、Crb2存在下において、CCケモカイン（X）によるezrinのリン酸化亢進とcortical actinの形成促進が明らかになった。マウスにnativeなリコンビナントCCケモカイン（X）を大量に投与する目的で、大腸菌による発現系の樹立を試みたが、aggregate formのみが得られたため、使用に至らなかった。そこで、市販のリコンビナントCCケモカイン（X）をC3H/HeNマウスに静注あるいは腹腔内投与を行った。これも蛋白尿は惹起できなかったが、使用濃度と期間の検定が必要と考えられた。しかし、C3H/HeNマウスから糸球体を単離し、このリコンビナントCCケモカイン（X）を反応させた後、電顕化で観察したところ、著明なポドサイト足突起の癒合が観察された。以上のことから、リンパ系組織内の生理的液性因子であるCCケモカイン（X）は、確かに糸球体のCrb2に結合し、ポドサイト障害を惹起させることが明らかになった。