2019 Fiscal Year Research-status Report
Functional analysis of fibrotic-region specific molecules and identification of novel profibrotic factors.
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19K08697
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
池田 洋一郎 東京大学, 医学部附属病院, 助教 (10407398)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | AAV濃縮 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本年度は腎線維化の原因となる間質細胞に特異的に感染を起こすためのAAVのセロタイプの特定と精製に特に注力してきた。
セロタイプは以前より使っていたものと人工的に加工したもので比較して以前使用してきたキャプシドがより感染力が高いことがわかった。ただし人工的に加工したセロタイプにも複数種類があり，近年，新しいものが入手できるようになってきていることから，今後も継続的に新しいキャプシドの感染力を確認していくこととする。
最も適切な細胞株でより多くのウィルスを効率よく産生し，それを精製するためにいろいろな方法を試してきたが，ウィルスを感染力を維持したまま濃縮することが困難であり，動物への投与時にウィルス量を多くしつつvolumeを減少させることが非常に難しいことがわかった。市販のキットも用いて精製するが濃縮・精製の過程で感染力が落ちており濃縮が困難であることが大きな問題となっている。今後は外注による濃縮も検討していく方針である。
線維化に直接関与する分子を筋線維芽細胞のモデルとなる10T1/2細胞株にてノックダウンすることで線維化の表現型が大きく抑制されることが確認できたことから，これをin vivoにて腎臓の間質で直接抑制することができるよう工夫してウィルスの濃縮・精製ができるようにする。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
ウィルスの精製が非常に難しい。市販のキットを用いても感染力を維持したまま回収・濃縮することが難しいことによる。
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| Strategy for Future Research Activity |
ウィルスの精製方法の見直し（抽出キット，セロタイプの変更，外注の精製の利用の検討）およびウィルスの動物投与の最適化を行う。
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| Causes of Carryover |
購入予定であった物品の納期が非常に送れていたため。次年度にて使用する予定。
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