2019 Fiscal Year Research-status Report
抑制型免疫受容体に着目した自己免疫性水疱症の制御機構の解明
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19K08782
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| Research Institution | Juntendo University |
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Principal Investigator |
伊沢 久未 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (80708313)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 天疱瘡 / ペア型レセプター / CD300 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
自己免疫性水疱症には表皮内水疱症と表皮下水疱症があり、それぞれ表皮細胞間蛋白と表皮基底膜構成蛋白に対する自己抗体が原因となる。表皮下水疱症の代表例として水疱性類天疱瘡（17型コラーゲンに対する自己抗体が原因）と後天性表皮水疱症（7型コラーゲンに対する自己抗体が原因）がある。これまでの国内外の研究結果から、マウスの17型コラーゲンあるいは7型コラーゲンに対するウサギポリクローナル抗体を利用することによって、マウス疾患モデルが確立されている。17型あるいは7型コラーゲンに対する自己抗体を含む免疫複合体がIgG受容体や補体受容体を介して（好中球を中心とする）ミエロイド系細胞を活性化（炎症性メディエーターを産生）して表皮下水疱を形成させると考えられている。
マウスの17型コラーゲンあるいは7型コラーゲンとGSTの融合蛋白を作製した後、受託にてウサギをGST融合蛋白で免疫し、17型コラーゲンあるいは7型コラーゲンに対するポリクローナル抗体の作製を試みた。マウス耳介凍結切片を用いた免疫染色やコラーゲンを固層化したELISAの系を利用して、各コラーゲンに対する抗体が作製されていることを確認した。さらに、作製した抗体を使用してマウスに表皮水疱症を誘導できるかを調べた。その結果、抗7型コラーゲン抗体の投与により後天性表皮水疱症モデルを誘導できることを確認した。現在、このマウスモデルを利用して後天性表皮水疱症の制御メカニズムの解析を行っている。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
野生型のBalb/cマウスの耳介に今回作製した抗17型コラーゲン抗体あるいは抗7型コラーゲン抗体を皮内注射した。抗17型コラーゲン抗体の皮内投与により誘導される皮膚症状（皮膚の肥厚・発赤の程度、病理所見など）は軽度であり、水疱性類天疱瘡モデルとしては不十分であった。抗17型コラーゲン抗体に関しては再度の抗体作製を開始した。一方、抗7型コラーゲン抗体の皮内投与により誘導される皮膚症状は重度であり、後天性表皮水疱症モデルを確立することができた。比較的少量の抗7型コラーゲン抗体により再現性をもって皮膚症状を誘導できたので、今後の病態解析に必要な抗体量を確保することができた。現在、野生型及びCD300f欠損マウスに対して抗7型コラーゲン抗体を用いた後天性表皮水疱症モデルの誘導を開始した。今後、経時的に臨床スコアを測定して、皮膚の病理所見を比較解析する予定である。また、皮膚組織から細胞を分離して炎症細胞（好中球・好酸球・マスト細胞・単球など）の数・比率や活性化マーカーの発現量を比較する予定である。現時点で、後天性表皮水疱症モデルに必要なポリクローナル抗体を作製することに成功し、水疱性類天疱瘡モデルの解析準備が整ったので、おおむね順調に進展していると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
野生型あるいはCD300f欠損マウスに対して抗7型コラーゲン抗体を利用する後天性表皮水疱症モデルを誘導して、CD300fが後天性表皮水疱症の病態形成を制御するかを明らかにする。また、マスト細胞特異的CD300f欠損マウス、好中球特異的CD300f欠損マウス、マスト細胞欠損マウス、好中球欠損マウスなどに同様の後天性表皮水疱症モデルを誘導して、この病態形成におけるマスト細胞・好中球の役割及びマスト細胞や好中球に発現するCD300fの役割を明らかにする予定である。また、野生型あるいはCD300f欠損マウスの骨髄からマスト細胞・好中球・マクロファージなどを誘導して、（CD300fリガンドである）セラミドvesicleの存在下・非存在下でミエロイド系細胞を免疫複合体（17型コラーゲンあるいは7型コラーゲンと各ポリクローナル抗体）あるいは補体で刺激する。放出される炎症性メディエーター（サイトカイン・ケモカイン・活性酸素など）の量をELISAなどで測定する。IgG受容体、補体受容体、CD300fあるいは細胞内シグナル伝達分子の会合やリン酸化を生化学的手法により解析する。また、これらの分子の細胞内局在を共焦点顕微鏡で解析する。これらの実験から、CD300fが免疫複合体によるミエロイド系細胞の活性化と自己免疫性水疱症の病態をどのように制御するかを明らかにする予定である。
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| Causes of Carryover |
計画はほぼ予定通りに進行したので、少量の残額を次年度の予算と合わせて必要な消耗品を購入することとした
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[Journal Article] CD300f is a potential therapeutic target for the treatment of food allergy.2020
Author(s)
Uchida S, Izawa K, Ando T, Yamada H, Uchida K, Negishi N, Kaitani A, Maehara A, Nagamine M, Kamei A, Takamori A, Maeda K, Nakano N, Shimizu T, Ogawa H, Okumura K, Nagahara A, Watanabe S, Kitaura J
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Journal Title
Allergy
Volume: 75
Pages: 471-474
DOI
Peer Reviewed
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[Journal Article] Differential lipid recognition by mouse versus human CD300f, inhibiting passive cutaneous anaphylaxis, depends on a single amino acid substitution in its immunoglobulin-like domain.2020
Author(s)
Izawa K, Kaitani A, Ando T, Maehara A, Nagamine M, Yamada H, Ando T, Ide T, Matsuzawa M, Okamoto Y, Yin E, Fukase S, Wang H, Kamei A, Uchida S, Keiko M, Nakano N, Uchida K, Tamura N, Ikeda K, Ebihara N, Shimizu T, Voehringer D, Roers A, Ogawa H, Okumura K, Kitaura J
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Journal Title
J Invest Dermatol.
Volume: 140
Pages: 710-713
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Receptor destroying enzyme (RDE) from Vibrio cholerae modulates IgE activity and reduces the initiation of anaphylaxis.2019
Author(s)
Yamazaki T, Inui M, Hiemori K, Tomono S, Itoh M, Ichimonji I, Nakashima A, Takagi H, Biswas M, Izawa K, Kitaura J, Imai T, Sugiura N, Tateno H, Akashi-Takamura S
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Journal Title
J Biol Chem.
Volume: 294
Pages: 6659-6669
DOI
Peer Reviewed
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[Presentation] Differential lipid recognition by mouse versus human CD300f, inhibiting IgE-mediated mast cell activation, depends on a single amino acid substitution in its immunoglobulin-like domain2019
Author(s)
Ayako Kaitani, Kumi Izawa, Tomoaki Ando, Akie Maehara, Enzhi Yin, Moe Matsuzawa, Saaya Fukase, Hexing Wang, Keiko Maeda, Nobuhiro Nakano, Ko Okumura, Jiro Kitaura
Organizer
第48回日本免疫学会
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[Presentation] Mast cell- and IgE-dependent anaphylaxis is regulated by the interaction between inhibitory LMIR3/activating LMIR7 and specific lipids2019
Author(s)
Kumi Izawa, Ayako Kaitani, Tomoaki Ando, Akie Maehara, Takuma Ide, Moe Matsuzawa, Saaya Fukase, Anna Kamei, Taiki Ando, Nobuhiro Nakano, Ko Okumura Jiro Kitaura
Organizer
第48回日本免疫学会
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[Presentation] Exaggerated inflammasome activation by a novel NLRP1 mutant derived from a rare disease with severe liver fibrosis2019
Author(s)
Taiki Ando, Akie Maehara, Tomoaki Ando, Kumi Izawa, Ayako Kaitani, Enzhi Yin, Takuma Ide, Keiko Maeda, Nobuhiro Nakano, Naoto Tamura, Ko Okumura, Jiro Kitaura
Organizer
第48回日本免疫学会
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[Presentation] Identification of inhibitory mechanisms in pseudo-allergy involving Mrgprb2/MRGPRX2-mediated mast cell activation2019
Author(s)
Yoko Okamoto, Ayako Takamori, Kumi Izawa, Tomoaki Ando, Ayako Kaitani, Akie Maehara, Enzhi Yin, Hiromichi Yamada, Hexing Wang, Nobuhiro Nakano, Ko Okumura, Jiro Kitaura
Organizer
第48回日本免疫学会
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[Presentation] An inhibitory receptor CD300f inhibits the pathogenesis of OVA-induced food allergy in mice2019
Author(s)
Anna Kamei, Shino Uchida, Hiromichi Yamada, Kumi Izawa, Tomoaki Ando, Naoko Negishi, Akie Maehara, Ayako Kaitani, Yoko Okamoto, Nobuhiro Nakano, Ko Okumura, Jiro Kitaura
Organizer
第48回日本免疫学会
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