骨髄形質細胞の遺伝子発現解析によるALアミロイドーシスの分子病態解明

2020 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K08831
• Research Institution: Chiba University
• Principal Investigator: 堺田 恵美子 千葉大学, 大学院医学研究院, 准教授 (60422218)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 三村 尚也 千葉大学, 医学部附属病院, 助教 (00422220) ; 塚本 祥吉 千葉大学, 医学部附属病院, 特任助教 (00814617) ; 中世古 知昭 国際医療福祉大学, 医学部, 主任教授 (30323398) ; 大和田 千桂子 千葉大学, 大学院医学研究院, 講師 (80436352) ; 武内 正博 千葉県がんセンター(研究所), 腫瘍・血液内科, 部長 (50466702)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: アミロイドーシス / 形質細胞類縁疾患 / クロナリティ / 微小残存病変

Outline of Annual Research Achievements

全身性ALアミロイドーシスは線維構造を有するアミロイド蛋白が全身臓器に蓄積し、種々の臓器障害をきたす難治性の骨髄腫類縁疾患であり、国の難病指定疾患のひとつである。アミロイド蛋白は、微量のモノクローナル形質細胞が産生するモノクローナル免疫グロブリン（M蛋白）軽鎖に由来するものである。しかし、その病因、遺伝学的特性は同定されておらず、有用な治療法や治療モニタリングに応用可能な微小残存病変（MRD）の同定に至っていない。そこで本研究では、AL アミロイド―シスの骨髄形質細胞に着目し、網羅的遺伝子解析と遺伝子発現解析に加え、単一細胞レベルで遺伝子変異解析とRNA発現解析、免疫グロブリンのレパトア解析を行うことにより病態の解明を行うことを目的としている。
千葉大学血液内科と日本赤十字社医療センターとの共同研究として研究を継続しており、IMGT/HighV-QUEST法およびVidjil法用いてIGLVレパトア解析およびモノクローナル形質細胞の同定を行った。解析対象はλ型M蛋白陽性のALアミロイドーシス, 多発性骨髄腫, 意義不明の単クローン性ガンマグロブリン血症（MGUS）である。IMGT解析、Vidjil解析を用いた解析を行い、ALアミロイドーシスのクローン同定が可能であった。ALアミロイドーシスで同定したdominant cloneのIGLV familyと障害臓器の関連に関して検討したところ、日本人における特有のパターンである可能性が示唆された。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

保存検体を用いた次世代シークエンサーによるレパトア解析は、おおむね順調に経過している。
シングルセル解析については、初発もしくは再発ALアミロイドーシスを解析対象としているため、適切な検体の確保にやや難渋したため。遅延が生じている。

Strategy for Future Research Activity

次世代シークエンサーを用いたALアミロイドーシスのクローン同定に成功しており、今後、さらに検討数を増やして解析を行う。
本検討結果と、他の形質細胞性疾患のクロナリティ―の相違解析、臨床情報との統合解析を進める。具体的には、ALアミロイドーシスのクローンサイズ、レパトアと治療効果、予後解析、さらには臓器特異性についての検討をさらに進める予定である。
また、アミロイドーシス患者検体を用いた形質細胞のシングルセルRNAシークエンスによる網羅的遺伝子発現解析とともに、骨髄間質細胞の網羅的遺伝子解析についても継続する。COVID禍にあり、検体確保に難渋しており、シングルセル解析検体数の確保のため、共同研究施設拡大の可能性を模索しており、プロトコールの改正を検討している。

Causes of Carryover

COVID禍にて研究対象検体数が解析対象検体数に及ばず、次年度一括して解析を行う方針としたため、他施設に所属する共同研究者分を次年度使用として承認した。
使用計画に変更はなく、解析物品費として使用する予定である。