2019 Fiscal Year Research-status Report
造血転写制御への新規介入方法の探索とその臨床応用に向けた研究
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19K08846
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
奥田 司 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (30291587)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
桑原 康通 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (30590327)
吉田 達士 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (80315936)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | RUNX1 / 白血病 / 転写因子 / Yeast two-hybrid / 翻訳後修飾 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでの多くの先行研究から、造血制御の中心的役割を担う転写因子、RUNX1、は種々の機能協調分子との会合をつうじてその作用を発揮するものと考えられている。当該研究では、RUNX1と機能的会合を行うコファクターの系統的探索をおこなっている。本年度は手始めに胎生中期マウス由来のcDNAライブラリーを用い、RUNX1をbaitとする接合法によってYeast two-hybridスクリーニングを行った。スクリーニングは10の6乗規模のものとなっていることを確認して遂行した。2回のスクリーニングの結果、初回スクリーニングで2種、そして2度目のスクリーニングでは16種の新規RUNX1会合候補を得た。これらのクローンは少なくとも酵母細胞内では確かに会合しているものであることを高ストリンジェンシー条件下の検討によって確認した。現在は動物細胞内でのRUNX1との相互作用の確認や、RUNX1の転写調節機能への影響を持つものの選別などについて順次詳細に検討を進めているところである。特に、2度のスクリーニングをつうじて再現性をもって検出されたクローンを得ており、この新規分子は培養哺乳類細胞内で、実際にRUNX1と会合することが免疫沈降法で確認できている。今後はこうした候補遺伝子群によるRUNX1作用への影響を詳細に明らかにしてゆく予定である。また、機能関連が確認できた分子については、遺伝子改変動物の新規作製や、機能性会合分子との結合をモニターしうる実験系構築なども視野に入れて、研究を展開させてゆきたい。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
本年度は2回のYeast two-hybrid screeningを成功裏に行うことができ、少なくとも酵母細胞を用いた遺伝学的検討からは特異的会合候補となる分子を複数特定できている。またそのうち１つについては実際に動物細胞内での会合を確認することができた。現在は、その生物学的意義についての検討を進めている。
以上の経過から、ほぼ計画通りの進捗と考えている。
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| Strategy for Future Research Activity |
今後は今回探索されてきた候補RUNX1会合分子群について、動物細胞内での会合について検討を進めるとともに、そのRUNX1作用への影響について解析を進めてゆく予定である。もしも機能協調を確認できたクローンを見出せば、遺伝子改変マウス作製を通じた詳細な機能解析や、RUNX1との会合をモニターすることで薬剤スクリーニングを行う実験系の立ち上げまで視野に入れて研究を進めてゆきたい。
一方、RUNX1が機能を発揮する細胞系譜や個体発生時期の細胞材料から新規cDNAライブラリーを作製し、これを用いたYeast two-hybridスクリーニングを、追加で、行いたいと考えている。こうした細胞から、重要な会合分子をさらに探索しうるものと考えている。
補完的アプローチとして、RUNX1のリン酸化変異体のノックインマウス作製を準備しており、この作製を完遂させたい。くわえて、メチル化変異体ノックインマウスについてはすでに作製して報告済であるが、実際にヒト症例で同様のRUNX1変異と疾患との関連性が見つかるかどうかの探索も試みたい。
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