2021 Fiscal Year Research-status Report

生体内ゲノム編集を利用したHTLV-1を標的にする新規抗ウイルス療法

Research Project

Project/Area Number	19K08870
Research Institution	Kagoshima University
Principal Investigator	鈴木紳介鹿児島大学, 鹿児島大学病院, 特例講師 (20437974)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	上野真一鹿児島大学, 医歯学総合研究科, 特任教授 (40322317) 石塚賢治鹿児島大学, 医歯学域医学系, 教授 (10441742) 魚住公治独立行政法人国立病院機構鹿児島医療センター(臨床研究部), 内科, 副院長・部長 (90253864)
Project Period (FY)	2019-04-01 – 2023-03-31
Keywords	HTLV-1 bZIP factor / ゲノム編集
Outline of Annual Research Achievements	ヒト T 細胞白血病ウイルス I 型 (Human T cell leukemia virus type I: HTLV-1) 由来の遺伝子を標的にし、体内ゲノム編集を利用した新規抗ウイルス療法の確立を目的としている。すべての HTLV-1 感染細胞で、3’側プロウイルスである、HTLV-1 bZIP factor (HBZ) 遺伝子は保存されいる。clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) /CRISPR-associated 9 (Cas9)システムは、感染細胞のゲノムに組込まれ、発現し続けるHBZ遺伝子を極めて効率的に機能失活させうることが可能な、ゲノム編集ツールである。 2019年度、我々はHTLV-1感染細胞を標的にし、アデノウイルスベクターを高効率で導入できることを報告した (Suzuki S et al. BMC Cancer. 2019)。 HBZ の触媒領域を標的にした2つのCRISPR/Cas9 gRNAsを作成した。HTLV-1感染T細胞株を用いて、HBZを標的にしたCRISPR/Cas9 gRNAsを導入し、HBZ の触媒領域の挿入・欠失変異と変異効率を解析中である。今後は、低悪性度ATL患者白血病細胞を用いて、HBZを標的にしたCRISPR/Cas9 gRNAsを導入し、HBZ の触媒領域の挿入・欠失変異による増殖抑制効果を解析する予定である。また、HBZを標的にしたCRISPR/Cas9 gRNAsを導入した、CMVプロモーター依存性アデノウイルスベクターも作成中である。感染細胞のゲノムに組込まれ、発現し続けるHBZ遺伝子をCRISPR/Cas9 ゲノム編集ツールを用いて、極めて効率的に機能失活させることが、発がんウイルスへの抗ウイルス療法の確立に重要と考えている。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason COVID19のパンデミック影響もあり、低悪性度ATL患者白血病細胞の検体収集が滞っている。今後も患者検体の収集は困難なことが予想される。
Strategy for Future Research Activity	HTLV-1感染T細胞株で代用し研究を推進する。細胞株は培養の過程で、多数の遺伝子変異が蓄積しており、HBZ 遺伝子への依存度は低下していることも予想される。
Causes of Carryover	COVID19のパンデミック影響もあり、低悪性度ATL患者白血病細胞の検体収集が滞っているため、現在までの進捗状況に遅れが生じている。また学会での発表機会も減少している。今後も患者検体の収集は困難なことが予想されるのでHTLV-1感染T細胞株で代用し研究を推進する際の消耗品・試薬の購入に用いる。また外部検査会社への委託注文も利用する。