2020 Fiscal Year Research-status Report

TNF受容体関連周期性疾患の疾患モデル細胞・モデルマウス作成と病態解析

Research Project

Project/Area Number	19K08923
Research Institution	Kawasaki Medical School
Principal Investigator	平野紘康川崎医科大学, 医学部, 講師 (10454828)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	向井知之川崎医科大学, 医学部, 准教授 (00454421) 井関將典川崎医科大学, 医学部, 講師 (30532353) 守田吉孝川崎医科大学, 医学部, 教授 (50346441) 松崎秀紀県立広島大学, 生命環境学部, 助教 (80335463)
Project Period (FY)	2019-04-01 – 2022-03-31
Keywords	TRAPS / TNF受容体関連周期性症候群 / 自己炎症性疾患 / TNF / 疾患モデルマウス
Outline of Annual Research Achievements	自己炎症性疾患TNF受容体関連周期性症候群（TRAPS）のモデルマウス4系統を作成した。同疾患で報告されているTNFRSF1AのT79M変異、C62Y変異をノックインしたマウスをゲノム編集により作成した。また当教室で同定した新規変異部位であるTNFRSF1AのG87V変異をノックインしたマウスも作成した。あわせて、T90I変異マウスも作成した。同変異は日本でTRAPSとの関連が報告されてはいるが、その病的意義についてまだ明らかでない変異である。通常飼育下においてはいずれの系統のマウス(ヘテロ変異、ホモ変異）とも、発育・成長に目立った異常はなく、血中TNF濃度・IL-1βの濃度、組織学的な内臓所見に野生型と比して変化は認めなかった。そのため、何らかの炎症惹起因子がTRAPSの炎症病態誘導に必要と考えた。マウスに対して、TNF依存的刺激である「LPS+D-galactosamin」で炎症惹起刺激を行った。結果、野生型マウスの多くが致死的経過をたどるのに対して、変異マウスは死亡率が低下するという、予想とは逆の表現型が見られた。その表現型は同時に検討したTNFR1KOマウスと同じであり、TRAPS変異はTNFR1KO様の反応を示した。その結果から、TRAPS変異はTNF以外の炎症刺激に過剰反応する可能性が考えられた。現在TRAPS変異マウスから骨髄由来マクロファージを培養し、各種炎症惹起刺激に対する反応を検討している。
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 3: Progress in research has been slightly delayed. Reason 予定していたマウス作成とその解析を計画の如く進めている。ただ、予想と逆の実験結果が得られた。その実験結果自体は新規知見につながる所見と考えられ、現在詳細解析を進めている。
Strategy for Future Research Activity	変異マウスの骨髄由来マクロファージを用いて、各種炎症刺激を加え,炎症反応の違いを検証する。TNF、リンフォトキシンα、TLR ligands、エピネフリン等による刺激を行う。炎症性サイトカイン産生をMultiplex assayを用いて網羅的に解析する。炎症惹起因子を同定したところで、マウス個体での炎症誘導を評価予定である。さらには,当教室通院中のTRAPS患者の末梢血単核細胞を用いて、ヒト細胞でも同様の反応が生じるかを検証する。
Causes of Carryover	物品費が当初予定より安価に抑えられたため、未使用額が発生した。未使用額は次年度の物品の経費に充てる予定である。
Remarks	川崎医科大学リウマチ・膠原病科のホームページに研究テーマとして紹介した。