2019 Fiscal Year Research-status Report
The role of GPR84 in NASH
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19K08983
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
宮澤 崇 九州大学, 大学病院, 講師 (30443500)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | NASH / マクロファージ / GPR84 / crown-like structure / 慢性炎症 / 線維化 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
糖尿病・肥満などの生活習慣病の増加を背景として非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）やNASH肝癌の罹患率が急増しており、NASH及びNASH肝癌の発症・進展機構の解明と予防・治療法の開発は喫緊の課題である。本研究では、脂肪肝からNASHを経てほぼ全例が肝癌を発症するヒトの病態に酷似したNASHマウスを用いて、過剰な脂肪蓄積により細胞死に陥った肝細胞を取り囲んで貪食・処理する特徴的な組織像（hepatic crown-like structure（hCLS））を形成するマクロファージに主に発現する、中鎖脂肪酸をリガンドとするGタンパク質共役型受容体GPR84に着目し、NASHの発症・進展機構の解明と医学応用を目指して研究を行っている。これまでに、GPR84ノックアウトマウスを導入し、NASHモデルマウスとの交配によりGPR84が欠損したNASHマウス（double KO; DKOマウス）を作製し高脂肪食負荷を開始した。また、GFPマウスの骨髄細胞を放射線照射したNASHマウスに移植する実験を行い、至適X線照射量の基礎検討を行った後、骨髄移植NASHマウスの作製に成功した。またNASHモデルマウスの肝臓組織を経時的にサンプリングし、GPR84遺伝子の発現を検討したところ、NASHの発症・進展の過程で肝臓におけるGPR84遺伝子の発現が亢進していることが確認できた。蛋白レベルでの発現を確認するため、GPR84に対する抗体を用いてウェスタンブロッティングを行ったが、非特異的バンドが多くみられた。また、免疫組織学的検討により肝臓局所でのGPR84の発現分布の確認を行ったが、こちらも特異的な染色が見られず、発現部位の詳細は不明のままであった。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
マウスの導入や交配によるDKOマウスの作製についてはほぼ計画通りに遂行できており、また骨髄移植実験も当初の計画通り進捗している。肝臓局所でのGPR84の発現を確認するためウェスタンブロッティングや免疫組織染色を行ったが、非特異的なバンドが見られるなど、検出可能な抗体が得られず、詳細な局在解析を行えなかった。今回導入したGPR84ノックアウトマウスはLacZがノックインされているので、今後はLacZ染色を行って、組織でのGPR84の発現局在及び病態進展における発現変化を観察する予定である。
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| Strategy for Future Research Activity |
現在、NASHモデルマウス及びDKOマウスに高脂肪食を負荷する実験を3ラン並行して走らせており、順次サンプリングを行って、肝臓組織における炎症性サイトカインや肝線維化マーカーの遺伝子発現および、免疫組織学的解析を用いてhCLSの数や肝線維化の程度を定量的に評価する予定である。また、骨髄移植NASHマウスもすでに作成済みで、現在高脂肪食の負荷を行っている。こちらのマウスに関しても順次解析を進めていく予定である。
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| Causes of Carryover |
遺伝子改変動物の導入が当初の予定より若干時間を要したことにより、本年度の予算の一部に残金が生じた。現在は、遺伝子改変動物の交配により実験に使用するマウスの作製も順調にすすんでおり、高脂肪食負荷及び維持は順調にできているが、本年度は当初の予定よりマウスの飼育にかかる費用が増える予定であり、次年度への繰越金をこれにあてる予定である。
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Research Products
(3 results)
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[Book] 炎症と免疫2019
Author(s)
宮澤 崇、小川 佳宏
Total Pages
4
Publisher
先端医学社
ISBN
978-4-86550-400-2
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