2020 Fiscal Year Research-status Report
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19K09012
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Research Institution | Keio University |
Principal Investigator |
木内 謙一郎 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 助教 (50528578)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
土居 雅夫 京都大学, 薬学研究科, 教授 (20432578)
宮下 和季 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 特任准教授 (50378759)
三上 洋平 慶應義塾大学, 医学部(信濃町), 講師 (80528662)
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Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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Keywords | 概日リズム / 概日時計 / 代謝 |
Outline of Annual Research Achievements |
概日リズムと代謝恒常性の関連は深く、リズムの障害は癌、メタボリックシンドローム、睡眠障害など幅広い疾患の病態生理への関与が示唆されている。実際に、概日リズムを司るのに重要な生体時計は癌細胞などの増殖細胞では発現の低下や振動の減弱が報告されている他、体内時計の欠損はミトコンドリアにおける酸化代謝を抑制し、解糖系を促進することが報告されており、体内時計の細胞増殖代謝への関与が示唆されている。本研究はT細胞が活性化する際の増殖代謝と概日時計の関与を検討するため、最初に脾臓におけるCD4陽性Tリンパ球のサブセットの割合において、概日時計が関与するかどうか検討を行った。8~12週齢のBmal1欠損マウスおよびコントロールマウスの脾臓よりセルソーターを用いてCD4陽性CD25陰性の細胞分画を単離し、更にCD44とCD62Lの発現に基づいて、ナイーブT細胞(Tn: CD44lo CD62Lhi)、セントラルメモリーT細胞(Tn: CD44hi CD62Lhi)、エフェクターメモリーT細胞(Tn: CD44hi CD62Llo)の割合を検討した。野生型、Bmal1欠損マウス共に、ナイーブT細胞の分画は約70%、エフェクターメモリーT細胞の分画は約15%であり、CD4陽性Tリンパ球のサブセットの割合に差は見られなかった。一方で、CD3/28抗体で刺激したところ、Bmal1欠損Tnで細胞増殖が亢進し、解糖系、グルタミン酸化酵素の遺伝子発現の亢進、MYC発現上昇が認められた。今後、トランスクリプトームやChIP-seqによる、T細胞活性化における概日時計の変容や概日時計を介した活性化T細胞の転写調節と増殖代謝を検討する予定である。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
1年目に、脾臓CD4陽性ナイーブTリンパ球をFACSにて単離後の細胞培養において、コンタミネーションが原因と思われる細胞死のため、CD3/28抗体刺激によるBmal1欠損マウスおよびコントロールマウス由来Tリンパ球の細胞分裂回数やRNA抽出の実験が実行出来なかったため。現在は本問題は解決しており、引き続き研究計画を遂行する予定である。
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Strategy for Future Research Activity |
CD3/28抗体刺激によるBmal1欠損マウス、Cry1/Cry2欠損マウスおよびコント ロールマウス由来Tリンパ球のトランスクリプトームやBMAL1, MYCによるChIP-seqを行うとともに、培養液中の乳酸酸性、グルコース・グルタミン消費を検討する。
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Causes of Carryover |
研究計画の若干の遅れにより、次年度使用額が発生した。翌年度分の助成金と合わせて、物品費などで使用する予定である。
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