2020 Fiscal Year Research-status Report
HMG-CoAレダクターゼ制御によるトリプルネガティブ乳癌新規治療法の開発
Project/Area Number |
19K09081
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Research Institution | Kyorin University |
Principal Investigator |
麻賀 創太 杏林大学, 医学部, 講師 (00327529)
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Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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Keywords | 乳癌 / トリプルネガティブ / HMG-CoA レダクターゼ / 予後因子 / 治療開発 |
Outline of Annual Research Achievements |
本研究の目的はトリプルネガティブ乳がん(TNBC)を対象としたmicroRNA網羅解析により、HMG-CoAレダクターゼ(HMGCR)とTNBCとの関連性が示されたことを踏まえ、HMCGRを介したTNBCの新規治療法を開発することである。 本研究においては、まずHMGCRに対する特異的抗体を用いた免疫染色法により、乳がん組織におけるHMGCR発現レベルをカテゴライズし、その結果と予後との関連について検討を行った。染色強度の判定は日常診療で頻用されているHER2の免疫組織染色の判定法を参考に、0, 1+, 2+ 3+の4段階に分類した。その結果、染色強度0に相当する症例は存在せず、すべての症例が1+から3+までの3段階のいずれかに分類された。染色強度とサブタイプ分類の関連性について検討を行ったところ、TNBCではその他のサブタイプに比べ染色強度3+の症例が比較的多く認められた。予後との関連については、統計学的有意差は認めなかった。つづいて、HMGCR高発現細胞株とHMGCRノックダウン細胞株の作成を行った。代表的な乳癌細胞株であるMCF-7およびSKBR3をベースにpF5AベクターにてHMGCRを導入し、qRT-PCRにて遺伝子導入は確認できたものの、Western blotでHMGCRのタンパク発現までは確認できなかった。この際、条件設定を様々に変更して検討を行ったため、当初の計画より進捗状況が遅延した。 本研究では、HMGCR遺伝子導入した細胞株とノックダウンした細胞株をin vitro共培養系にて増殖させ、薬剤耐性の変化を検討する方針である。まずは基礎実験としてMDA-MB-231およびMDA-MB-468を用いて、我々が確立した共培養系で安定した発育がなされることを確認した。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
HMGCR遺伝子導入細胞株の作成に際し、qRT-PCRでは細胞株内に遺伝子が導入されたことを確認できたものの、Western blotでHMGCRタンパクの発現を確認することができなかった。ベクターの変更、Western blotの条件変更、細胞株の変更等、様々な試みを行ったが、問題解決に至らず、研究の進捗が遅延した。
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Strategy for Future Research Activity |
Western blotによる遺伝子導入の確認については、今後も条件を変えて検討を続けるが、同時にin vitro共培養系において薬剤耐性を確認するための実験系の確立を進め、HMGCR過剰発現株の確立がなされ次第、次のステップに進めるよう準備する方針である。
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Causes of Carryover |
研究の進捗状況が当初予定より遅延したため、今年度購入予定であった物品が未購入となったため、次年度使用額が発生した。
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