2021 Fiscal Year Research-status Report
Investigation of mechanisms of neuropathic pain using compartment culture
| Project/Area Number |
19K09379
|
|---|
| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
|---|
Principal Investigator |
柴崎 雅志 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 講師 (20405319)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
|
| Keywords | 神経障害性疼痛 / 後根神経節 / コンパートメントカルチャー / 一次知覚神経 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
Campenot chamberを用いたin vitroモデルによって神経障害時に増加する物質を調査するのが今回の実験の趣旨である。包括的な調査のために傷害群と非傷害群においてSDS-PAGEを行い、結果の比較をすることによって非障害群に特異的な物質を絞り込む予定であった。しかし、SDS-PAGEを行っても特異的なバンドは認められなかった。
Campenot chamberにおける軸索の伸長量が不十分であったため、より高濃度のタンパク質を得るためには、より効率的なchamberを使用する方がよいと考えられた。しかし、従来使用されているテフロン製のCampenot chamberは非常に高額であり、プロトタイプの作成には適しておらず、3Dプリンターを用いて作成した、ポリ乳酸(PLA)を素材とするchamberによってテストできないかと考えた。まずは従来型のテフロン、およびPLA製のCampenot Chamberを用いて培養し、両群の発育状況の違いを調査した。
その結果、従来型のテフロンの方が明らかにPLAより神経細胞の発育が良いことが明らかになった。この結果についてはOpen Life Sciencesにオリジナル論文として掲載されている(doi: https://doi.org/10.1515/biol-2022-0031)。
上記結果により、3Dプリンターを用いたPLA製の素材でプロトタイプを作成し、有効性を検討することは困難であると考えられた。
最終目的には近づけなかったものの、過去に実際に3Dプリンターを用いた作成した機材が神経培養細胞に与える影響を調査した研究はなく、一つの有意義な研究をし、成果を得ることができた。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
当初予定していたSDS-PAGEを用いた方法では、十分な量の特異的なタンパク質を得ることができなかった。そのため、方針の変更を余儀なくされた。
より高収率のタンパク質を得る目的のため、Campenot chamberの形状を工夫する必要があると判断し、従来型のテフロン製のCampenot chamberと3Dプリンターを用いたPLA製のCampenot chamberにおける培養神経細胞の軸索の伸長を比較したものの、残念ながらテフロンの方が軸索の伸長に有利であるという結果であったため、3Dプリンターで作成したPLA製のプロトタイプを作成して収率を高めるのは困難であると考えられた。
そのため、方針の変更が必要となる。
|
| Strategy for Future Research Activity |
代替手段として、PLA以外の素材を用いることも考えられるが、今回の結果によるとその有効性については期待できないかと考えられる。
特異性は下がるが、Campenot chamberにこだわらずin vitroで障害を行うか、候補物質を絞って抗体を用いて検出する、などの方法を検討している。
|
| Causes of Carryover |
実験の計画書に沿って立案し、一定の成果はあったものの、主題となる実験については完遂することができなかった。主題となる実験を進めるため、計画の方向性を変更し実験を継続する予定である。
|
