2023 Fiscal Year Research-status Report
Development of evaluation system for frozen and aged oocytes / ova using membrane potential measurement
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19K09807
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| Research Institution | Fukushima Medical University |
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Principal Investigator |
三宅 将生 福島県立医科大学, 医学部, 助教 (00381385)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2025-03-31
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| Keywords | 膜電位 / 卵細胞 / 胚 / 生殖医療 / 体外受精 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
凍結融解胚の電位測定によって、電位測定の特性とゼロ電位胚の特徴を検索した。卵への電極刺入時には、まず針先が透明帯を貫通する必要がある。胚の電位測定においては、この透明帯貫通時に一旦マイナスの電位を示し、その後深く刺入したのちにはプラスを示すという二相性が見られる。この現象は、採卵時のマウスの週齢が４週齢でも９週齢でも、雌マウスの週齢に関わらず同様に観察されている。しかし、ゼロに近い電位を示す胚や透明帯除去胚ではあまり観察されない。
本年はこうした現象と凍結融解操作との間の関係性の有無、また細胞外液の組成がそれに与える影響について検討した。未受精卵、胚ともに、透明帯除去によって二相性の電位が消失していることが確認されたが、EDTAやEGTAなどキレート剤の添加や、顆粒膜細胞除去時および透明帯消化時の酵素処理条件（酵素濃度および細胞外液のイオン組成）はこうした結果に影響を与えなかった。受精前、受精直後だけでなく、２細胞期、４細胞期で測定した場合でも同様の結果が確認された。なお、未受精卵を測定する際に顆粒膜細胞が付着した状態で測定しても結果に影響しなかった。一方で、電位測定後に振り分けた胚の発現パターン解析などの分子生物学的実験を予定していたが、胚数を増やして実験を行う必要が生じたため、これは次年度に先送りすることとした。
これら上記の内容の一部は、主に日本生理学会第101回大会において発表された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
分子生物学的実験に必要な、条件振り分け後の胚を十分数得ることができなかったため。
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| Strategy for Future Research Activity |
ゼロ電位胚と通常電位胚との間での発現解析を行う予定である。また、採卵を多数行い、mRNAが十分量確保できるようであれば、mRNA-seqやマイクロアレイを用いた網羅的な解析を行い、どのような違いがあるのかを明らかにしたいと考えている。
リソソーム酵素やミトコンドリアDNAのコピー数解析と並行して、透明帯の膜電位への関与の有無があるのか、あるとすればどのような原因によるものか、についても明らかにしたいと考えている。
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| Causes of Carryover |
前年度までに支弁した試薬の在庫があることと、凍結済の胚を使用したため、新規試薬の消費額が生じなかった。今年度は網羅的な分子生物学的解析を行う予定のため、予定額を支弁する予定である。
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