母体血中の細胞外小胞による妊娠高血圧腎症の予知法と発症関連蛋白に関する研究

2022 Fiscal Year Annual Research Report

• Project/Area Number: 19K09810
• Research Institution: Jichi Medical University
• Principal Investigator: 鈴木 寛正 自治医科大学, 医学部, 准教授 (90406116)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 大口 昭英 自治医科大学, 医学部, 教授 (10306136)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 妊娠高血圧腎症 / エクソソーム / 予知 / 超遠心法 / カラム法

Outline of Annual Research Achievements

超遠心法によりエクソソームを精製し、総エクソソームの量の測定系を確立し、カラム法による精製から得られる総エクソソームの量に違うかを検討することにした。
エクソソーム精製方法のスタンダードてある超遠心法で血漿保存試料から総エクソソームを精製し、エクソソームの特異的抗原であるCD63のELISA法を用いて総エクソソーム濃度を測定したが、感度以下で測定ができなかった。精製されたエクソソームの量が少ないためと考え、各血漿保存試料の量を増やしたり、タンパク質抽出溶液を変更したりなどして再検討した。
その結果、CD63はそもそもヒトの血漿保存試料内の総エクソソームは低発現であり、CD63のELISA法では、安定して測定ができないことがわかった。一方エクソソームの別の特異抗原であるCD9が他の特異的抗原と比べても高発現であることが判明したため、CD9のELISA法で測定したところ、測定感度以上であり、総エクソームの測定ができることが判明した。このため、現在CD9のELISA法を用いて、血漿保存試料の正常妊婦の妊娠週数別の総エクソソームの正常値（曲線）を作成するとともに、妊娠高血圧腎症妊婦の発症後の総エクソソームの量が異なるのか現在検討を行っている。
また別に市販の3種類のエクソソーム精製キット（カラム法）を用いて、正常妊婦と妊娠高血圧症候群妊婦の血漿保存試料から総エクソソームの分離精製を行い、同様にCD9のELISA法で総エクソソーム濃度を測定している。超遠心法と市販のカラム法での総エクソソームの量との間に、違いがあるのか、最も超遠心法と相関のあるカラム法はどれかを検討中である。