2019 Fiscal Year Research-status Report
Transcriptomic profiles of HC regeneration induced by YAP inhibitors
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19K09867
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| Research Institution | Kyoto University |
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Principal Investigator |
喜多 知子 (嶋知子) 京都大学, 医学研究科, 研究員 (20362519)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大森 孝一 京都大学, 医学研究科, 教授 (10233272)
中村 亮介 京都大学, 医学研究科, 研究員 (40736708) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | YAPシグナル / 内耳再生 / chick / 有毛細胞 / 阻害剤 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、有毛細胞の形成・再生におけるYAPシグナルの役割を、既知のNotchやWntシグナルとの関わりを含めて解明することにより、効率および完成度の高い「難聴再生治療」の実現を目指すものである。
まず、YAPの発現細胞の特定ならびに細胞内発現分布について、chickenとmouse の蝸牛感覚上皮サンプルにおけるYAPと支持細胞マーカー等の組織学的評価を行った。①発生段階と②ex vivo器官培養による傷害（・再生）段階、の二種類につき観察を行った。具体的には以下を用いた。①Mouse：胎生期（耳胞形成期E9, 有毛細胞分化転換期E13.5）、新生仔期（P2）Chicken：胎生期（有毛細胞分化転換期E8）、孵化直後（P1）②Mouse：P2 mouse の薬物傷害（Neomycin, Diphtheria toxin）Chicken：P1 chick の薬物傷害・再生（Streptomycin）。その結果、①核内YAP発現は、有毛細胞形成期および再生期の感覚上皮にて確認され、有毛細胞の分化に伴い核外（細胞質）移行を示した。②有毛細胞形成・再生後の感覚上皮はYAP自体の発現が極端に低下していたが、周辺細胞ではYAPの高い発現維持を認め、主に細胞質での局在を示した。
次に、上記のYAP発現部位の特性から、③YAP発現細胞の更なる特定と④NotchおよびWntシグナル阻害による有毛細胞再生制御過程におけるYAP局在、およびYAP阻害剤の有毛細胞再生に及ぼす影響について予備検討を行った。Agr3抗体との共染色およびEdUラベルでは、共局在するものとしないものがあった。また、Chickenの傷害・再生モデルにおけるNotch、Wnt、YAPシグナル阻害剤添加時の蝸牛感覚上皮は、評価箇所による個体差が大きく、評価法の設定が鍵になると考えられた。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
Notch、Wnt、YAPシグナルの阻害剤を用いた予備検討実験において、評価箇所によるサンプル個体差が大きく、本試験までに何らかの改善策が必要であると考えられた。例えば、既報あるいはメーカー推奨濃度の範囲で、器官培養系への添加濃度やタイミングの条件検討、あるいは評価箇所の決定（例えば、NeuralとAbneural、ProximalとDistal、Whole mountとSectionなど）が必要であると考えられる。
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| Strategy for Future Research Activity |
【進捗状況】にも述べたが、Notch、Wnt、YAPシグナルの阻害実験において、様々な条件検討を効率的に行う必要があると考えられた。
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| Causes of Carryover |
国際学会での発表準備と研究室内の電源工事および備品移動に伴い、２月以降の実験進捗が殆どできなかった。【進捗状況】【今後の研究推進方策】に記載した内容で、遅れた部分の計画を効率的に進めたい。
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