2021 Fiscal Year Research-status Report
Regulation of the ciliary beat by intracellular Ca2+ oscillation in the nasal epithelial cells
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19K09879
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| Research Institution | University of Occupational and Environmental Health, Japan |
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Principal Investigator |
鈴木 秀明 産業医科大学, 医学部, 教授 (20187751)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大淵 豊明 産業医科大学, 医学部, 講師 (00412651) [Withdrawn]
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 線毛運動 / 鼻粘膜 / 細胞内カルシウム / 単離細胞 / Fluo-8 / 電位依存性カルシウムチャネル / オシレーション |
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| Outline of Annual Research Achievements |
（１）下鼻甲介切除術で切除したヒト鼻粘膜におけるT型電位依存性カルシウムチャネルの発現を、蛍光免疫染色法とRT-PCR法により再確認した。その結果、前年度の実験と同様にCav3.1とCav3.3が発現しており、実験結果の再現性に問題ないことが確認された。
（２）下鼻甲介粘膜を磨りつぶして還元試薬で溶解し、Western blot法でタンパクの発現を調べた。その結果、T型電位依存性カルシウムチャネルCav3.1とCav3.3のバンドが確認された。
（３）免疫透過電顕の手法によりT型電位依存性カルシウムチャネルCav3.1とCav3.3の超微形態レベルでの局在を調べた。その結果、どちらのチャネルも線毛上皮細胞の線毛原形質膜と線毛の基部に存在していることが判った。
（４）下鼻甲介粘膜表面をブラッシングして線毛上皮細胞を単離し、培養液中に浮遊させた。この懸濁液をアドヘッシブ・スプレーでコーティングした薄底ディッシュに移し、単離細胞がディッシュの底に貼り付くまで静置した。次に、細胞内Ca蛍光指示薬（Flou-8, 5μM）を負荷し、倒立蛍光顕微鏡（Carl Zeiss Axioskop 2 Plus）で細胞内の蛍光を観察しながらT型電位依存性カルシウムチャネルの特異的拮抗薬（mibefradil, NNC55-0396）を加えた。その結果、蛍光が減衰していくことが確認され、T型電位依存性カルシウムチャネルが線毛上皮細胞内のCaイオンの移動に関与していることが示された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
研究計画の方向性をT型電位依存性カルシウムチャネルの発現とその機能的関与に修正してから、科学的に有意義な結果が順調に得られるようになった。
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| Strategy for Future Research Activity |
鼻粘膜線毛上皮細胞におけるT型電位依存性カルシウムチャネルの機能的関与をさらに掘り下げていく。具体的には線毛運動とT型電位依存性カルシウムチャネルとの関連、線毛運動を制御する他の因子（cAMP/CGMP、AT放出チャネル、プリン受容体、creatine kinaseなど）との関連を薬理学的実験で調べていく。
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| Causes of Carryover |
残額の2202円は、物品等の購入の際に端数まで正確に合わせることができなかったためであり、次年度に繰り越して使用する予定である。
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