2021 Fiscal Year Annual Research Report
サイクリン依存性キナーゼ５を標的とした糖尿病網膜症治療
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19K09951
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| Research Institution | The University of Tokushima |
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Principal Investigator |
三田村 佳典 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 教授 (30287536)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
仙波 賢太郎 徳島大学, 病院, 助教 (10745748)
江川 麻理子 徳島大学, 大学院医歯薬学研究部(医学域), 講師 (70507657)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 外科 / 細胞・組織 / 生体分子 / 糖尿病 / 臨床 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
過去に我々は腫瘍増殖などに伴う異常な血管新生や脈絡膜血管新生に関与しているPPARγ (peroxisome proliferator-activated receptor gamma)が糖尿病網膜症の進行にも関与していることを報告した。また、2015年のNature誌にサイクリン依存性キナーゼ5(Cdk5: Cyclin-dependent kinase 5)がPPARγの糖尿病誘発作用を促進することが発表され、糖尿病網膜症の進行においてもPPARγがCdk5の制御を受けている可能性が想定できた。今回、硝子体手術で得られる増殖膜と硝子体液を用いてCdk5活性を検索し、増殖糖尿病網膜症においてCdk5の異常な活性化がないか、PPARγ濃度との相関がないかを確認するため本研究を施行した。
黄斑円孔・黄斑上膜（新生血管を含まないコントロール）、増殖糖尿病網膜症の手術時に灌流液を流す前に前房水・硝子体を吸引した後、直ちに-80℃にて保存した。また、黄斑上膜、増殖糖尿病網膜症の増殖膜検体を採取し、免疫染色用検体については直ちにOCT compoundに包埋し凍結させた後、-80℃にて保存した。RT-PCR用の検体についてはトリゾール0.5ccに浸し4℃にて保存した。増殖膜および特発性黄斑上膜の網膜前膜のヒト手術検体からRNAを抽出した後cDNAを合成した。Cdk5およびCdk5の制御因子であるp35に特異的なプライマーを用いた定量的PCR法により、両群におけるCdk5、p35遺伝子発現量を比較検討した。また、両群のヒト手術検体から凍結切片を作成し、蛋白レベルでの発現パターンについてCdk5抗体を用いた免疫染色法により比較した。さらに硝子体中のPPARγ、Cdk5の濃度をenzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)によって測定した。
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