2021 Fiscal Year Annual Research Report
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19K09984
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| Research Institution | Institute of Physical and Chemical Research |
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Principal Investigator |
前田 亜希子 国立研究開発法人理化学研究所, 生命機能科学研究センター, 客員研究員 (40776423)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大西 暁士 国立研究開発法人理化学研究所, 生命機能科学研究センター, 客員研究員 (70569102)
万代 道子 国立研究開発法人理化学研究所, 生命機能科学研究センター, 副プロジェクトリーダー (80263086)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 網膜色素変性 / iPS細胞 / 薬物治療 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
前年度までの検討によりリードスルー効果のある化合物を複数同定し、このうち効果の高い2つの化合物において容量依存性の検討を行い適切な濃度と細胞への安全性を確認している。
実験１では再現性をもって293細胞を用いたルシフェラーゼを用いたアッセイにてリードスルー効果を確認した。
実験２ではRP2変異を持つ網膜症患者から得たiPS細胞を用いて網膜色素上皮細胞を分化した。RPE細胞の特徴（RPE特異遺伝子の発現など）を解析し、RPE細胞であることを確認した。患者由来網膜色素上皮細胞におけるRP2タンパク質の発現はウェスタンブロットにて確認されなかった。この患者由来網膜色素上皮細胞を上記化合物の存在下で培養するとRP2タンパク質の発現回復が確認された。
実験３ではRP2変異をもつトランスジェニックマウスラインの樹立を試みた。今年度にマウスコロニーを得ることができ、RP2変異マウスラインを樹立することができた。トランスジェニックマウス網膜組織学検討において6か月齢までに網膜変性は起こらないことがわかった。変性は観察されないものの、マウス眼のウェスタンブロットにてRP２タンパク質の発現を認めないことから、マウス網膜を上記化合物存在下で培養した。培養3日後にはRP2タンパク質の発現回復を認めた。正常マウス網膜と比較してもRP2タンパク質発現は十分であることが示唆された。
これらの結果から、リードスルー効果のある化合物の同定することができた。
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