2020 Fiscal Year Research-status Report
網膜色素上皮細胞の脂質プロファイルとドルーゼン形成メカニズムの解明
| Project/Area Number |
19K09991
|
|---|
| Research Institution | Kyoto University |
|---|
Principal Investigator |
池田 華子 京都大学, 医学研究科, 准教授 (20372162)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
大石 明生 京都大学, 医学研究科, 特定病院助教 (50572955) [Withdrawn]
岩井 祥子 京都大学, 医学研究科, 特定研究員 (00768905)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
|
| Keywords | 加齢黄斑変性 / iPS細胞 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
日本における中途失明の原因として増加中の加齢黄斑変性（AMD）では、網膜色素上皮（RPE）の加齢に伴う機能障害により生じるドルーゼンが病態形成に重要である。RPEは脂質代謝が大変盛んな細胞であるが、病変サンプリングが不可能であったため、これまで脂質プロファイルやドルーゼン形成との関連・ドルーゼン形成メカニズム解明が困難であった。本研究では、ドルーゼン患者・眼底健常者から樹立したiPS細胞から分化させたRPE細胞を用い、細胞内脂質プロファイルを明らかにすることを目的とした。
R2年度は、ドルーゼン（AMD・ADRD）患者および正常眼底コントロールから樹立したiPS細胞からわれわれの確立した分化法にて、約半年かけて、RPEを作成し、さらに、牛外節を1ヶ月以上貪食させることで、生体眼中でのRPE細胞の状況を模倣した。
健常人iPS細胞由来RPEと患者由来RPEでの形態に差異があるか、免疫染色、光学顕微鏡、電子顕微鏡による検討を行った。次いで、RPEの重要な機能の一つである貪食能に関して、蛍光ビーズおよび、蛍光標識視細胞外節を用い、FACSによる定量評価、ウェスタンブロッティングによる評価を行った。また、メンブレン上で分化させたiPS-RPEを長期培養し、メンブレンと細胞の間に蓄積するドルーゼン様沈着物の形成能に差異があるか、ApoEやC5-9の抗体を用いた免疫染色を行い、評価した。また、次年度のRPEの脂質解析・遺伝子発現評価のために、健常および患者由来のiPS細胞からRPE細胞への分化誘導を行った。
|
| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当初の計画通りに研究を進めることが出来た。
|
| Strategy for Future Research Activity |
予定通り、脂質解析、遺伝子発現解析へと研究を進めていく。
|
| Causes of Carryover |
今年度は、COVID－19の影響で、学会などへの出張が取りやめになったことが大きい。次年度は、今のところ、学会などへの参加は可能と考えるため、予定通り、全額使用予定である。
|
Research Products
(7 results)
