2021 Fiscal Year Annual Research Report
免疫受容体TREM2に着目した炎症性骨破壊のメカニズム解析と治療戦略の検討
| Project/Area Number |
19K10075
|
|---|
| Research Institution | Meikai University |
|---|
Principal Investigator |
坂東 健二郎 明海大学, 歯学部, 講師 (50347093)
|
|---|
| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
長谷川 紘也 明海大学, 歯学部, 講師 (00635899)
|
|---|
| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
|
| Keywords | TREM2 / sTREM2 / macrophage / LPS / chemokine / RAW264.7 |
|---|
| Outline of Annual Research Achievements |
TREM2 は LPS による細胞内シグナルを抑制的に調節すると考えられているが、詳細な調節機構は明らかになっていない。そこで、マウスマクロファージの細胞株である RAW264.7 細胞の Trem2 mRNA の発現を siRNA で抑制し、LPS 刺激後の34種類のケモカインの遺伝子発現を網羅的に解析した。LPS 刺激後、2時間で誘導されるケモカインは13種類あり、そのうち、Trem2 siRNA で発現が抑制されたのは5種類であった。LPS によるケモカインの誘導においては Trem2 は一部で促進的に働いていると考えられる。
マクロファージの TREM2 は LPS により発現が抑制される事が知られている。そこで、RAW264.7 細胞の TREM2 の発現を Flow cytometry で確認したところ、LPS 刺激後2時間で細胞膜上の TREM2 はほとんど消失していた。次に、培養上清中の TREM2 を ELISA で測定したところ、LPS 刺激により、TREM2 濃度がコントロールの5倍に増加していた。これらの事から、LPS 刺激により細胞膜上から消失する TREM2 の一部は細胞外に遊離していると考えられる。
細胞外に遊離した TREM2 が LPS によるケモカインの誘導に関わっているのかを調べるため、TREM2 の細胞外ドメインの組換えタンパク質を培地に添加し、LPS でマクロファージを刺激した。すると、Trem2 をノックダウンした細胞において発現が抑制された5種類のケモカインの内、CXC ケモカイン2種類の発現が組換え体 TREM2 により回復した。
これらの結果は、細胞膜から遊離した TREM2 もマクロファージの LPS によるケモカイン発現に一部で関わっている事を示唆している。
|
