2019 Fiscal Year Research-status Report
染色体工学技術を利用したゲノムライティングによる口腔がんの発生機構の解明
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19K10086
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| Research Institution | Tottori University |
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Principal Investigator |
久郷 裕之 鳥取大学, 医学(系)研究科(研究院), 教授 (40225131)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 染色体 / がん |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究は、ヒト扁平上皮がんにおけるヒト3番染色体上の3p21.3領域に存在が示唆されるテロメレース(TERT)抑制遺伝子(群)の同定と機能解析を目的としている。
本年度は、ヒト3番染色体を保持しTERTの抑制効果が確認されているHSC3#3に対して、得られた9つの候補遺伝子をそれぞれsiRNAでノックダウンする実験を行った。その結果、遺伝子AとBにおいてTERTの発現上昇が確認された。加えて、遺伝子AとBをそれぞれ、親株であるHSC3で過剰発現させるとTERTの発現が抑制された。
一方、遺伝子AおよびBのコード領域を含むBACの人工染色体への搭載について、遺伝子Aについては候補クローンが得られている。遺伝子Bについては現在進行中である。
また、人工染色体へ3p21.3領域を搭載するためにヒト3番染色体へのloxPサイトの挿入する実験においては、予定ではDT40を用いて組換えを行う予定であったが、実験の効率化を図るため、ゲノム編集による手法を用いて行うこととした。予備実験としてHCT116細胞の内在性のヒト3番染色体へターゲティングを行った結果、3p21.3領域へのloxPサイトの挿入に成功した。この結果を受けて、、CHO細胞に保持されているヒト3番染色体へloxPサイトを挿入する実験を現在行っている。挿入が確認されたクローンが減られれば人工染色体への3p21.3領域の搭載を行っていく予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
候補遺伝子の中から、TERT発現に影響する遺伝子を見出すことができている。また、候補遺伝子領域をコードするBACの人工染色体への搭載についても、一定の成果がえられていることに加えて、人工染色体へ3p21.3領域の搭載においても、目的達成に向けて順調に結果が得られているため。
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| Strategy for Future Research Activity |
遺伝子AおよびBによる増殖能を含めた抗がん効果を検討していく。また、BACおよび3p21.3領域を搭載した人工染色体を完成させ、HSC3細胞へ導入し、その機能評価を行う。
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| Causes of Carryover |
研究を進めていく上で必要に応じて研究費を執行したため当初の見込み額と執行額
が異なった。しかし、差額は少額であり、研究計画に変更はなく、前年度の研究費も含め、当初予定通りの計画を進めていく。
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