2021 Fiscal Year Annual Research Report
継代培養による歯根膜細胞複製劣化に対するスフェロイド培養の応用と分子基盤の解明
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19K10133
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| Research Institution | Kyushu Dental College |
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Principal Investigator |
臼井 通彦 九州歯科大学, 歯学部, 准教授 (10453630)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | スフェロイド / 歯根膜細胞 / 骨分化 / 幹細胞性 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
組織再生に必要な間葉系幹細胞を獲得するために、単層培養（二次元培養）によって、細胞数を増加させる必要があるが、継代数を重ねるに伴い、増殖能、幹細胞性や多分化能が喪失されることが報告されている。スフェロイドは細胞塊のことで、細胞を三次元の状態で培養することができる。スフェロイドの状態で培養することにより、間葉系幹細胞の生理機能が向上することが知られている。本研究の目的は、スフェロイド培養を用いて、継代数の増加により生理機能の衰えた歯根膜幹細胞を回復することができるか否かを検証することを目的に以下の研究を行った。歯根膜幹細胞を3日間単層培養した群と3日間スフェロイド培養した群からRNAを抽出した。そのRNAを用いて、次世代シークエンサーであるIllumina HiSeqシステムを使用してRNA-seqを実施し、Differentially expressed genes DEGs）について解析した。歯根膜細胞スフェロイドに強く発現していた転写因子であるNR4A2に着目して、機能解析を行った。NR4A2の遺伝子発現ベクターを作製し、NR4A2過剰発現が歯根膜幹細胞スフェロイドに与える影響について検証した。NR4A2の過剰発現した歯根膜幹細胞スフェロイドはコントロール群と比較して、骨分化能、幹細胞性において有意な差は見られなかった。
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