2022 Fiscal Year Annual Research Report
A new strategy for mucosal regeneration by primary adult human epithelial progenitor/"stem cells" keratinocyte from oral mucosa
Project/Area Number |
19K10275
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Research Institution | The Nippon Dental University |
Principal Investigator |
宮坂 孝弘 日本歯科大学, 生命歯学部, 准教授 (30190755)
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Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
宮澤 敦子 日本歯科大学, 生命歯学部, 助教 (00706997)
古賀 陽子 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (10392408)
近津 大地 東京医科大学, 医学部, 主任教授 (30343122)
八重垣 健 日本歯科大学, 生命歯学部, 教授 (40166468) [Withdrawn]
里見 貴史 日本歯科大学, 生命歯学部, 教授 (70276921)
松野 智宣 日本歯科大学, 生命歯学部, 教授 (80199827)
米山 勇哉 日本歯科大学, 生命歯学部, 助教 (10759799)
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Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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Keywords | 幹細胞 / 口腔粘膜 / 細胞シート / ケラチノサイト / 再生医療 / ePUKs |
Outline of Annual Research Achievements |
ヒト口腔粘膜より単離したケラチノサイトから産生されたePUKs (epithekial Pop Up Keratinocytes)のin vitroでの生物学的評価を産生細胞数、細胞生存率および細胞サイズを測定することで行った。ePUKsは通常のヒト口腔粘膜由来ケラチノサイトの培養方法とは異なり、通常の2倍の培地を使用し、毎日培地交換を行うことで培地上清中に産生される細胞である。培養を開始し、80%コンフルエントになった後、培養上清中に少しずつePUKsが産生され始めた。その後産生されたePUKsを毎日採取し評価を行った。その結果、4、5日目に産生されたePUKsの細胞サイズは通常のヒト口腔粘膜由来ケラチノサイトと比較して小さく、また細胞生存率も高い結果となった。さらに本研究では採取したePUKsを播種して培養することで、ePUKsのモノレイヤーから産生されるpop-pop細胞についての評価も行った。またePUKsおよびpop-pop細胞が培養上清中に産生した増殖因子の vascular endothelial growth factor(VEGF)の量は通常のヒト口腔粘膜由来ケラチノサイトと比較して有意に高い値を示した。またePUKsを用いた口腔粘膜シートを作製し、その評価をin vitro 免疫蛍光化学染色で行った。最終年度には作製した口腔粘膜シートを口腔粘膜欠損マウスに移植してその有用性を評価する予定であったが口腔粘膜シートの作製が滞り、動物実験まで進むことができなかった。しかしながら、本研究の結果から、ePUKsとpop-pop細胞は通常のヒト口腔粘膜由来ケラチノサイトと比較してより幹細胞に近いということが示唆された。
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