唾液検査に応用する口腔癌バイオマーカーをメタボローム解析と多重蛍光染色で検証する

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K10367
• Research Institution: Tokyo Dental College
• Principal Investigator: 片倉 朗 東京歯科大学, 歯学部, 教授 (10233743)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 菅原 圭亮 東京歯科大学, 歯学部, 准教授 (10506926) ; 別所 央城 東京歯科大学, 歯学部, 非常勤講師 (30433973) [Withdrawn]
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 口腔扁平上皮癌 / 唾液 / プロテオーム解析 / 多重蛍光染色

Outline of Annual Research Achievements

「口腔癌患者の唾液中に特徴的に発現する代謝物の再現性の検証」について、術前の口腔癌患者および健常者の全唾液および血液（血液検査時の残血）を3mlを採取し、LC-MS解析を行い（フィルジェン(株)に委託）口腔癌患者に特徴的に認められるタンパク質および代謝物をOncologyReports,2017DOI:10.3892で報告した25種の物質と比較検証する。バイオマーカーとして価値が高いと考えられるタンパク質および代謝物に対し、Real-timePCRやWestern Blotting、口腔癌細胞株HSC-３およびHSC-４での染色によりその同定を行う。検証ができた物質のうちTSAにより発色可能な物質をバイオマーカーの候補として選択を予定している。それと並行して「患者の口腔癌（舌癌・歯肉癌）の切除標本からの組織採取と保管」を進め、唾液を採取した患者の手術検体から壊死組織を含まない癌組織を約10mm×10mmで採取する。検体は２分割または３分割し、それぞれを中性緩衝ホルマリン溶液固定と-80°Cの凍結標本および遺伝子解析用およびタンパク質抽出用として、約3mm×3mm角組織片ブロックの収集・保存を行っている途中である。現在必要採取検体数を確保しており、LC-MC解析および多重蛍光染色を委託している。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

２０２１年度はコロナウイルス感染症蔓延により単施設のみでの検体採取が困難な状況もあった。また、現在、追加での検体採取およびLC-MS解析、多重蛍光染色を行っている。

Strategy for Future Research Activity

2022年度は2021年度に採取した検体数のTSA多重染色による癌組織におけるバイオマーカー候補物質の共局在の観察から、「バイオマーカー候補とする代謝物質の組み合わせによる口腔癌識別能力の多重ロジスティック解析」を進めていく。

Causes of Carryover

LC-MS解析に関して、必要検体数が揃った段階でまとめて委託する予定となったことが次年度使用額が生じた要因である。