2020 Fiscal Year Research-status Report

次世代シークエンサーを用いた戦略的インプラント周囲炎細菌叢遷移

Research Project

Project/Area Number	19K10475
Research Institution	Osaka Dental University
Principal Investigator	草野薫大阪歯科大学, 歯学部, 准教授 (80382498)
Co-Investigator(Kenkyū-buntansha)	山田陽一大阪歯科大学, 歯学部, 准教授 (20345903) 馬場俊輔大阪歯科大学, 歯学部, 教授 (40275227) 南部隆之大阪歯科大学, 歯学部, 講師 (80367903)
Project Period (FY)	2019-04-01 – 2022-03-31
Keywords	細菌叢 / インプラント周囲炎
Outline of Annual Research Achievements	インプラント治療の普及と超高齢社会の到来に伴い，埋入後のメンテナンス不良によってインプラント周囲炎に悩む患者が急増している．これまでインプラント周囲炎に対する様々な治療法が提案されてきたが，標準基準と呼べる治療法は未だ確立されていないばかりか，同じ治療法でも患者ごとにその効果が異なっているのが現状である．本研究は，インプラント周囲炎病巣から採取したサンプルの細菌叢を次世代シークエンサーによって解析し，臨床症状の変化と結びつけることにより，インプラント周囲炎難治化や予後を初期細菌叢から探るものである．２年目となる令和２年度は，初年度に確立した実験系をもとに，インプラント周囲炎患者からのサンプリングとその細菌叢解析を進めてきた．（１）インプラント周囲炎患者からのサンプリングと細菌叢解析大阪歯科大学医の倫理委員会の承認のもと，インフォームドコンセントを得たインプラント周囲炎患者10名からペーパーポイントにより歯肉縁下プラークを採取した．DNA抽出の後，16S rRNA配列をもとに次世代シークエンサーMiSeq（イルミナ社）を用いてサンプル中の細菌DNA配列を解読した．我々が構築したRスクリプトをベースにしたパイプラインにより，疾患と細菌叢との相関解析を進めているところである．（２）細菌叢培養系の構築上記のin vivoの解析に加え，in vitro条件での菌叢変化を解析するために，SHI培地を用いた細菌叢培養の実験系を確立しているところである．現在，インプラント周囲炎菌叢を維持しつつ培養可能な条件が明らかになりつつある．
Current Status of Research Progress	Current Status of Research Progress 2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned. Reason 多少の実験の前後はあるが，おおむね当初の計画通りに実験が進捗している．
Strategy for Future Research Activity	これまでの研究で得られた結果をもとに，次の研究を進める．１．インプラント周囲炎患者からのサンプルの採取と細菌叢解析（20名の被検者選定を目指す）　２．サンプル採取した患者の症状の追跡（炎症の具合をモニターし，必要に応じて追加サンプリングを行う） 3．細菌叢のin vitro培養系を用いて，インプラント周囲炎菌叢の特徴を抽出する．
Causes of Carryover	新型コロナウイルス感染症による大学への出勤自粛，サンプリング時期の遅れにより，次世代シークエンサー（MiSeq）での解析開始が遅れたため，研究費の次年度使用が生じた．令和３年度も不透明な部分あるが，研究計画の挽回が難しい場合，研究期間の延長も検討する．