ゲノム編集技術を用いた1,2-ジクロロプロパンの毒性機序の解明

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K10589
• Research Institution: National Defense Medical College
• Principal Investigator: 吉岡 範幸 防衛医科大学校(医学教育部医学科進学課程及び専門課程、動物実験施設、共同利用研究施設、病院並びに防衛, 衛生学公衆衛生学, 助教 (70365229)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: 1,2―ジクロロプロパン

Outline of Annual Research Achievements

塩素系有機溶剤である1,2―ジクロロプロパン（DCP）やジクロロメタン（DCM）が使用されていた印刷事業場の従業員に胆管がんが多発したが、ヒトにおいてみられたこの胆管がんは動物実験では再現できていない。これはヒトと動物ではこれらの有機溶剤に関する薬物代謝酵素の種類や発現量が異なることが考えられている。本研究は1,2－ジクロロプロパンの曝露により、胆管がんが発生するメカニズムを解明するために、ヒトiPS細胞由来肝細胞や株化細胞を用い、ゲノム編集技術を使ったCRISPR sgRNAライブラリーによるノックアウトスクリーニングを行い、胆管がん発生に関与する遺伝子を探索することが目的である。
2021年度は前年度検討した曝露条件に基づき、ノックアウトスクリーニングを実施した。まず、ヒトiPS細胞由来肝細胞に1，2－ジクロロプロパンを曝露した。曝露終了後その培養上清をsgRNAとCas9をトランスフェクションし作製したMMNK-1細胞の変異細胞ライブラリーに曝露させ培養した。終了後、抗γH2AX抗体を用いてDNA損傷した細胞をセルソーターにより選別した。選別した細胞、曝露条件ごとに次世代シーケンサーによる解析を行い、1,2―ジクロロプロパンと関連する遺伝子を探索した。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

実験と次世代シーケンサーによる解析は終了している。

Strategy for Future Research Activity

追加実験と研究成果の報告を行う。

Causes of Carryover

次年度に追加実験と研究成果報告を実施するため。