Diagnostic meaning of enterobacillus phenyl acetyl glutamine as uremic toxin in forensic autopsy case.

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K10699
• Research Institution: Fukuoka University
• Principal Investigator: 久保 真一 福岡大学, 医学部, 教授 (10205122)
• Co-Investigator(Kenkyū-buntansha): 原 健二 福岡大学, 医学部, 講師 (00090738) ; ウォーターズ ブライアン 福岡大学, 医学部, 助教 (00609480) ; 高山 みお 福岡大学, 医学部, 助教 (40804802) [Withdrawn] ; 柏木 正之 福岡大学, 医学部, 准教授 (70301687) ; 松末 綾 福岡大学, 医学部, 講師 (70309920) ; 池松 夏紀 琉球大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (20848410)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2022-03-31
• Keywords: フェニルアセチルグルタミン / 尿毒素 / 死因 / 法医解剖 / クレアチン

Outline of Annual Research Achievements

2019年度は、尿中のフェニルアセチルグルタミン（PAG）の分析法の検討と、法医剖検例の分析を行った。【材料・方法】症例：2017年1月1日から2018年12月31日までの2年間に福岡大学医学部法医学教室で解剖した法医解剖230例のうち、解剖時に尿が採取できた97例について分析した。【結果・考察】尿中PAG濃度と年齢、性別、死後経過時間、障害発生から死亡までの時間（期間）との関係：尿中PAG濃度と年齢、性別、死後経過時間との関係を、相関係数、群間比較を用いて統計学的に検討したところ、尿中PAGと年齢との間に、弱い正の相関を認めたが、性別に有意差は認めなかった。尿中PAGは、死後経過時間の影響は認められなかった。一方で、クレアチン（Cr）は、死後変化に伴い分解されることから、死後変化の影響を考慮し、死後経過時間48時間以内の症例（64例）について、尿中PAGの法医剖検診断の意義の研究対象とした。健康成人尿6検体について、尿中PAG濃度とCr濃度を測定した。尿中PAG濃度は95～436μg/mL、Cr濃度は92～185mg/dLで、Crで補正したPAG/Crは0.063～0.236mgであった。そこで、我々の健康成人の尿中PAG濃度を基準値として採用した。尿中PAG濃度が333.3μg/mL（平均＋SD）以上を異常群、462.1μg/mL（平均＋2SD）以上を高度異常群として検討を行った。研究対象とした64例のうち、尿中PAG異常群は5例で、全て高度異常群（最小値477、最大値863μg/mL）であった。そこで、これら5例について検討を行った。基本データ、1) 性別、2) 年齢、3) 死後経過時間、4) 障害発生から死亡までの経過時間（期間）、5) 死因について検討したが、明らかな特徴を認めなかった。今後、尿中PAG/Crおよび尿中PAG濃度が異常を示す要因の解明に取り組む。

Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

【尿中PAGの分析法】試薬：PAG-d5、カフェイン-d3の内部標準物質(IS)液他を用いた。試料調製：尿0.1 mL、脱イオン水0.3 mL、IS液、ウレアーゼ水溶液0.04 mLを混ぜ、30分後、アセトニトリル2 mL、酢酸0.05 mLを混ぜ、抽出カラムに通液、続いてアセトニトリル2 mLとアンモニア水0.1 mL（CBA）または2M塩酸0.1mL（SAX）の混合液を流し、酢酸0.3mLを入れたガラス試験管に、通過液を採取した。窒素気流下で濃縮乾涸した。残渣をメタノール／酢酸プロピル(5/1)に溶解し、GC-MSで測定した。測定条件：カラム：ZB-SemiVoltiles/BPX5タンデムカラム、オーブン温度80℃から調整した。この分析法で安定的な結果が得られた。
【分析症例数】2017年1月1日から2018年12月31日までの2年間に福岡大学医学部法医学教室で解剖した法医解剖230例のうち、解剖時に尿が採取できた97例について分析した。さらに分析結果の解析により、研究対象を、死後経過時間を48時間以内とすることとした。その結果、研究対象症例は64例となった。研究対象の条件が明らかになったことから、今後の研究対象は、死後48時間以内の症例とする。
【PAGの診断意義について】64例の尿中PAGの分析の結果、5例が異常値であった。この5例について、年齢、性別、死後経過時間、障害発生から死亡までの時間（期間）、死因の基本データの解析した結果、診断意義を明らかにすることはできなかった。
今後は、研究対象症例を増やすこと、Cr補正値で尿中PAG濃度を再評価することで、診断意義の解明を進める。

Strategy for Future Research Activity

2019年の研究実績により、研究対象を死後経過時間48時間とすることが明らかとなった。PAGの濃度をCr補正することとした。
【材料・方法】死後経過時間48時間以内の剖検例を追加し、研究対象症例を累積していく。分析法については、引き続き改良点がないかの検討を続ける。さらに、尿に加え、血液の抽出法を検討する。
【PAGの診断意義について】尿中PAG/Cｒ値の異常値症例について、基本データの他に、症例の病態を剖検所見等から解析し、診断意義を検討続ける。さらに、血中PAG濃度を新たに、分析項目とすることで、尿中PAG/Cｒの診断意義の解明に繋げる。

Causes of Carryover

本年度の研究は、概ね予定通りの補助金額で実施したが、少額（3,070円）の次年度使用額が発生した。令和２年度は、この次年度使用額を含めて、予定通りの予算額で執行する予定である。大幅な、予算執行の変化は生じるものではない。