2020 Fiscal Year Research-status Report
生活習慣病に合併する肝癌の早期診断マーカーの開発：血中細胞外小胞の解析
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19K11640
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| Research Institution | Yamaguchi University |
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Principal Investigator |
山口 奈津 山口大学, 大学院医学系研究科, 助教 (40450671)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
佐伯 一成 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (60634756)
田邉 剛 山口大学, 大学院医学系研究科, 教授 (80260678)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | 非B非C型肝癌 / 細胞外小胞 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
近年急増する非Ｂ非Ｃ型肝癌は、肝癌の約３割を占めるが、成因不明のためハイリスク群の同定方法が確立していない。糖尿病を主とした生活習慣病がリスク要因である可能性が示されており、これらの患者を１次スクリーニングで拾い上げることが想定されている。スクリーニング後に非Ｂ非Ｃ型肝癌を効率的に早期発見するためには、他疾患との高い識別能をもつ低侵襲な診断法が必要である。
本研究では、非Ｂ非Ｃ型肝癌の識別能の高い診断マーカーを開発する観点から、腫瘍で高発現するタンパク質を含むと推察される血中細胞外小胞を用いることを想定し、肝癌細胞が遊離する細胞外小胞で高発現するタンパク質を明らかにし、このタンパク質が診断マーカーとして必要十分な検出力を持つのかを臨床検体を用いて明らかにすることを目的とする。血液からの細胞外小胞の分離はスタンダードとなる方法がいまだ確立していないが、細胞外小胞を凝集させずに物理化学的特性を保持した状態で分離できる新たな調整法を導入することにより、従来法よりもはるかに正確なEVのデータを得ることができ、また標的タンパクを発現する細胞外小胞の検出力を高めることができる。
今年度も引き続き、研究協力者が開発した、細胞外小胞の物理化学的特性を保持した新たな調整法を参考に、肝癌由来細胞株（HepG2）や対照として用いる細胞株（OUMS-36等）の培養上清を用いた細胞外小胞精製の条件検討を行った。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
新型コロナウイルス感染症の影響および薬品用冷凍庫の故障等で実験を中断する期間が生じた。現在、細胞外小胞調整の条件検討を進めているが、発現タンパク質の網羅的解析による候補分子の同定には至っていない。
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| Strategy for Future Research Activity |
肝癌由来細胞株とヒトiPS細胞由来肝細胞の培養上清から細胞外小胞を調整し、発現タンパク質について質量分析法を用いて網羅的に解析することにより、肝癌由来細胞株で高発現するタンパク質を明らかにする。また、他癌細胞株、非癌細胞株の培養上清からも細胞外小胞を調整し、候補タンパク質の発現をイムノブロット法により解析し、肝癌細胞の培養上清から得られた細胞外小胞と比較することにより、肝癌で特異的に発現する分子かどうかを確認する。このようにして同定した候補タンパク質の肝癌識別能について、臨床検体を用いた検証を行う。
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| Causes of Carryover |
新型コロナウイルス感染症の影響およびバイオフリーザーの故障等で実験を中断する期間が生じた。今年度行う予定だった実験は次年度に行う予定である。この未使用額については、令和3年度の実験試薬の購入に充てる。
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Research Products
(1 results)
