2019 Fiscal Year Research-status Report
GADD34による老化関連疾患の制御メカニズムの解析
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19K11687
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| Research Institution | Saitama University |
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Principal Investigator |
西尾 尚美 埼玉大学, 教育学部, 准教授 (80513457)
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| Co-Investigator(Kenkyū-buntansha) |
磯部 健一 名古屋女子大学, 家政学部, 教授 (20151441)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | GADD34 / インスリンレセプターシグナル伝達系 / 脂質代謝 / 糖質代謝 / NASH |
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| Outline of Annual Research Achievements |
これまでGADD34遺伝子欠損マウスが加齢とともに脂肪肝発症やⅡ型糖尿病を発症し、若齢時には亢進しているインスリンシグナル伝達系、加齢と共に低下をすることがわかっている。加齢と共に脂肪肝やをⅡ型糖尿病を発症する原因はインスリンシグナル伝達系のみならず、脂質代謝や糖質からの脂質合成も関与が考えられる。そこで本年度は、GADD34遺伝子欠損(GADD34 KO)による脂質代謝、糖質代謝の変化を検索するため、まずはC57BL/6マウスを用いて基本的な肝臓代謝について解析を行った。マウスに高脂質(HFD)、高糖質の他、NASH発症モデルとなる高脂質コリン欠乏食(CDAHFD)、高脂質高たんぱく質の鶏卵を与え、脂肪肝の形成と肝臓組織における脂質や糖質代謝の酵素やインスリンシグナル伝達系のタンパク質発現を確認した。この実験で、血清生化学検査及び、肝臓の組織標本は分担研究者の磯部が行い、肝臓のWestern Blottingは西尾が行った。
その結果、高脂質(HFD)よりも高糖質(Sugar, Glucose, Fluctose)を与えた方がより強い脂肪肝の発症が認められ、CDAHFDにおいても脂肪肝が発症したがHFDやCDAHFDと脂質含量が同程度鶏卵では脂肪肝やNASHの発症が認められなかった。そこで、現在はGADD34 KOマウスを用いて同様の実験を進めている。GADD34 KOマウスではHFDでの早期脂肪肝は認められたが、CDAHFDではWTとの差は認められていない。このことから、GADD34がある特定の脂質や糖質代謝の代謝経路に関与していることが考えられ、今後さらに検討していく予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
これまで多くのサンプルを準備し、3月に解析を行う予定であったが、新型コロナウイルス感染症の影響で、移動が困難となり、解析が止まってしまったため。
しかし、移動制限が解除となればすぐにでも測定ができる状況にある。
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| Strategy for Future Research Activity |
本年度はGADD34遺伝子欠損(KO)マウスの供給が間に合わなかったため、C57BL/6マウスで様々な検討を行うことで、実験系の立ち上げと基礎的なデータの蓄積を行ったので、次年度以降はこれらの実験系とデータを基に、GADD34 KOマウスを使って研究を進める予定である。in vivoの実験として、GADD34 KOマウスの肝臓でInsulin/IGF1シグナル伝達系、mTORシグナル伝達系、G-CSRシグナル伝達系、TGF-βシグナル伝達系に加えて、糖質、脂質代謝について2~12週齢のマウスを使って解析を行い、GADD34 KOマウスの加齢に伴う脂肪肝発症のメカニズム解明を目指す。
さらに、様々な栄養素摂取状況のマウスから作成したMEF細胞やGADD34遺伝子移入したHEK293細胞を用いて、in vitroの実験として、免疫染色や免疫沈降など細胞レベルの解析を行い、最大の課題である、GADD34の機能部位を分子レベルで特定することを目指す。
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| Causes of Carryover |
3月にサンプルの解析を行う予定であったが、新型コロナウイルス感染症の影響で、移動が困難となり、解析が止まってしまったため、解析に使う抗体などの購入を１次的に止めた。緊急事態制限解除後に実験が可能となり次第購入することとしている。また、予定していた測定機器の修理費用についても同様に緊急事態制限解除後に使用予定である。
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Research Products
(1 results)
