2019 Fiscal Year Research-status Report
腸管寄生原虫の新規共生ウイルスの探索とその役割の解明
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19K16003
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| Research Institution | Kyoto Prefectural University of Medicine |
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Principal Investigator |
村越 ふみ 京都府立医科大学, 医学(系)研究科(研究院), 助教 (20759906)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | Eimeria / ニワトリ / コクシジウム / 共生ウイルス |
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| Outline of Annual Research Achievements |
クリプトスポリジウムやアイメリアなどの寄生性原虫は畜産環境において問題となるが、近年、その原虫の多くに2本鎖RNA (dsRNA) ウイルスが共生していることが明らかとなった。さらに、共生dsRNAウイルスが存在すると、原虫の宿主に対する病原性が高まるという報告が存在する。
そこで、腸管寄生性原虫における共生ウイルスの影響を調べることを目的とした。しかし、アイメリア原虫において、共生ウイルスを検出した報告は単報のみであり、本邦のニワトリアイメリアにおける共生ウイルスの有無は不明である。そこで、まずは全国からニワトリアイメリア検体を集め、次世代シーケンサーを用いて新規の原虫共生ウイルスの探索を行った。検出配列から、ウイルスのRNA依存性RNAポリメラーゼの配列検索を行ったところ、、ニワトリアイメリアから既知および新規のウイルス様配列を検出した。そのうちの1種は、海外で報告されたニワトリアイメリアから検出されたウイルス配列と近縁であった。従って、日本のアイメリアに共生ウイルスが存在することをはじめて示した。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
3: Progress in research has been slightly delayed.
Reason
今年度は、全国から収集したアイメリア検体から、次世代シーケンサーを用いてアイメリア共生ウイルスおよび新規ウイルス様配列を検出した。本年度はアイメリア原虫からの核酸抽出の条件検討を行った。アイメリアは硬いオーシストに覆われているため、核酸抽出が困難であるが、条件検討を行うことによって次世代シーケンサーおよびPCR解析に必要な量の核酸を抽出できるようになった。本条件検討に時間がかかり、課題の進捗に遅れが生じた。
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| Strategy for Future Research Activity |
今回、アイメリア原虫から共生ウイルスの配列を検出したため、次年度は、共生ウイルスのプライマーを作成し、PCR解析を用いたアイメリア共生原虫の疫学調査を行う予定である。
さらに、dsRNA抗体および共生ウイルスの配列を元に作成したペプチド抗体を用いて、免疫蛍光染色によるアイメリア共生ウイルスの局在解析を行う。
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| Causes of Carryover |
本年度は、収集したニワトリアイメリアの核酸抽出方法の条件検討を中心に行ったため、使用額が予定よりも下回った。繰り越された金額は来年度のPCR解析や抗体作成に使用する予定である。
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