2020 Fiscal Year Annual Research Report
発癌促進因子YAPに着目した核内受容体CAR依存的な肝発がんの機序及び種差の解明
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19K16352
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| Research Institution | University of Shizuoka |
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Principal Investigator |
志津 怜太 静岡県立大学, 薬学部, 助教 (50803912)
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2019-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | YAP / CAR / 肝がん / 種差 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
組換えタンパク質を用いたプルダウンアッセイの結果、マウスCARはYAPと相互作用し、ヒトCARは相互作用しない結果を得た。段階的にドメインを欠失させたYAPタンパク質を用いた相互作用解析により、YAPのマウスCARとの相互作用領域はWWドメインであることを明らかにした。WWドメインはPYモチーフ（PPxYのアミノ酸配列）と特異的に相互作用することが知られており、マウスCARはそのタンパク質構造の表面側にPYモチーフ（PPAY）をもつが、ヒトCARではこれがPPAHに変異しており、この一アミノ酸の違いがYAPとの相互作用の種差の原因と思われた。そこで、マウスCARのPYモチーフをヒト型に変異させた変異体CARY150Hについて、CARのYAPとの相互作用および肝発がんプロモーション作用に与える影響を調べた。組換えタンパク質を用いたプルダウンアッセイにより、Y150H変異はYAPとマウスCARの相互作用を抑制することを見出した。他方、ヒトCARにマウス型のPYモチーフを導入したH140Y変異体はヒトCARとYAPの相互作用を誘導した。ゲノム編集によりCARY150H変異マウスを作成し、CARY150H変異マウス及び野生型マウスにCAR活性化薬であるフェノバルビタールを投与しその後の肝細胞増殖を調べた。両マウスにおいてCARの標的遺伝子であるCyp2b10遺伝子の誘導が認められたが、野生型マウスでは、CAR活性化に伴う細胞増殖マーカーであるKi-67陽性肝細胞の増加と増殖関連遺伝子の増加が確認されたのに対し、CARY150H変異マウスでは、CAR依存的な増殖マーカーの増加が認められなかった。以上より、CARはPYモチーフを介してYAPと相互作用すること、CAR依存的な肝細胞増殖および肝発がんの種差は、PYモチーフの一アミノ酸の差異による可能性が示された。
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