2021 Fiscal Year Research-status Report
胆管癌におけるインテグリンαvβ6の発現機序解明と治療応用への展開
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19K16550
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| Research Institution | Tokyo Medical and Dental University |
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Principal Investigator |
副島 友莉恵 東京医科歯科大学, 大学院医歯学総合研究科, 講師(キャリアアップ) (60596964)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
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| Keywords | 胆管癌 / インテグリンβ6 / RNA-seq解析 / PODXL2 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
昨年度までに胆管癌株細胞HuCCT1を用いて、CRISPR/Cas9システムによりITGB6ノックアウト（ko）細胞株を作製した。ITGB6-ko細胞では移動能、浸潤能、遊走能、コロニー形成能の低下を示し、インテグリンβ6が治療標的および悪性度評価の指標として有用となる可能性を明らかにした。しかし、胆管癌におけるインテグリンβ6の発現制御機構は未解明な点が多いため、ITGB6発現制御因子を明らかにすることを目的とした。方法は、HuCCT1-wild type (wt)とITGB6-ko細胞からRNAを抽出し、RNA-seq解析を行った。ITGB6-koによる発現変動遺伝子をt-testおよびlog2 Fold Changeで絞ると、ITGB6-koで発現低下した遺伝子が38個、発現増加した遺伝子が92個抽出された。これらの遺伝子のうち、細胞の移動や接着と関連が示唆される遺伝子（PODXL2, CLDN2, S100A2, TSPAN8, LGALS1, CEACAM6）に着目し、リアルタイムPCRによりmRNAの発現量を調べた。2つのITGB6-ko細胞において、PODXL2の有意な発現低下をみとめた。つづいてPODXL2蛋白質発現を蛍光免疫染色で調べた所、PODXL2はHuCCT1-wtでインテグリンβ6と共局在を示し、ITGB6-ko細胞で発現減衰がみられた。また、肝内胆管癌組織材料を用いてPODXL2の免疫組織化学的解析を行った結果、インテグリンβ6の発現と相関を示し、発生部位、発現様式、漿膜浸潤、胆管浸潤などの臨床病理学的所見との関連が明らかとなった。今後さらに、PODXL2の分子生物学的特徴の解析と、インテグリンβ6を標的とした治療法の開発を進める予定である。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
4: Progress in research has been delayed.
Reason
2021年度も新型コロナウイルス感染症の影響で動物実験室の制限や、学生の登校規制、他の業務のエフォート増加により思うように進められなかったため、2022年度も引き続き実験を行う。
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| Strategy for Future Research Activity |
これまで、ITGB6ノックアウト胆管癌細胞の作製および、RNA-seq解析によりITGB6関連遺伝子を調べ、有意な関連がみられたPODXL2についてヒト肝内胆管癌組織材料を用いて免疫組織化学的解析を行い、インテグリンβ6発現との相関や臨床病理学的所見との関連を明らかにした。
今後は、siRNAによりPODXL2の発現を抑制し、分子生物学的特徴の変化やインテグリンβ6発現との関連を調べる。また、インテグリンβ6を標的とした新規治療法の開発を目指し、siRNAによる核酸医薬の作製を検討するため、胆管癌細胞株を用いたin vitroおよび胆管癌細胞株移植マウスを用いたin vivoで実験を進める予定である。
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| Causes of Carryover |
2021年度も新型コロナウイルス感染症の影響で動物実験室の制限や、学生の登校規制、他の業務のエフォート増加により思うように進められなかったため、2022年度も引き続き実験を行う。
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