2019 Fiscal Year Research-status Report
TLR刺激によるフラビウイルスの病原性亢進メカニズムの解析
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19K16669
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Research Institution | Osaka University |
Principal Investigator |
鈴木 達也 大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (10837272)
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Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2021-03-31
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Keywords | フラビウイルス / Toll-like receptor / 自然免疫 / 蚊 |
Outline of Annual Research Achievements |
蚊の唾液により日本脳炎ウイルス(JEV)の病原性が亢進するかどうかを検討するため、3種類の蚊(アカイエカ、ヒトスジシマ、ハマダラカ)より唾液腺を採取し、唾液腺抽出物(SGE)とJEVとを共に野生型マウスの皮下に感染させた。その結果、いずれのSGE刺激においてもJEVの病原性が亢進された。病理組織学的検索により、SGE刺激により感染局所において免疫細胞の浸潤が生じていることが分かった。申請者の先行研究からTLR1/2またはTLR9刺激によりJEVの病原性が亢進することを明らかにしている。TLR1/2またはTLR9リガンド刺激ではSGE刺激と同様に免疫細胞の浸潤を伴う炎症反応が観察された。この反応はTLR1/2刺激で顕著で、さらにJEV感染により増強することが分かった。次に、マスサイトメーター(CyTOF)を用いてSGEやTLR1/2刺激により感染局所に浸潤してくる免疫細胞の集団を網羅的に解析した。非刺激、JEVのみ、JEVとTLR1/2リガンド、JEVとSGEの4群を比較したところ、非刺激やJEVのみの群に比べて、JEVとTLR1/2リガンドまたはJEVとSGE刺激群では、共通して好中球の浸潤が顕著に生じていることが明らかとなった。さらに、TLR1/2刺激によるJEVの病原性亢進における好中球の重要性を検討するために、マウスに抗Ly6G抗体を投与することで好中球の除去を行った。抗Ly6G抗体処理により、感染局所での好中球浸潤や炎症反応は減弱され、またマウスの生存率も上昇することが明らかとなった。したがって、JEVの病原性亢進には好中球が重要であることが示された。
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Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
当該年度では、蚊のSGEを用いた検討により、SGE刺激がJEVの病原性を亢進すること、感染局所に炎症性細胞の浸潤をもたらすことを確認できた。また、TLR1/2刺激ではSGE刺激と同様に感染局所に炎症細胞浸潤を誘導することを明らかにするとともにCyTOFを用いた網羅的解析により、両刺激によって誘導される免疫細胞は好中球が主体であることを示している。このように唾液刺激とTLR1/2刺激によるフラビウイルス病原性亢進機構において、共通して好中球の重要性を見出しており、順調に進行していると考えられる。
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Strategy for Future Research Activity |
SGE刺激やTLR刺激により感染局所や末梢組織におけるウイルス増殖の変化を検討する。また、抗Ly6G抗体による好中球の除去がSGE刺激による日本脳炎ウイルスの病原性亢進に与える影響を検討する。 さらに、デングウイルスやジカウイルスといった他のフライウイルス感染においても、唾液刺激やTLR刺激により日本脳炎ウイルスと同様に病原性の亢進が引き起こされるかどうかなどを検討することで、本研究における発見が多くの蚊媒介性フラビウイルスにおいて共通する現象であるかどうかを検討する。
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Causes of Carryover |
当該年度では動物施設利用料金が当初予定していたものより少なかったため、差額が生じている。 次年度では、主にウイルスRNA測定のためのリアルタイムPCR試薬等のフローサイトメータやマスサイトメーターに用いる抗体試薬などの消耗品、マウスの飼育管理費やマウス購入費用に用いる予定である。 さらに大阪大学微生物病研究所の中央実験施設での次世代シーケンサー解析(RNA-seq)などの外注費用や海外の学術誌に投稿するための英文校閲費と論文投稿料に使用する予定である。また参加予定であった国内・海外の学会が延期になったため旅費として計上していたものを物品費やその他の費用で使用する予定である。
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Research Products
(1 results)