FGFR2遺伝子増幅胃癌におけるFGFR2C3variantを標的とした研究

2019 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K16767
• Research Institution: Aichi Cancer Center Research Institute
• Principal Investigator: 足立 雄太 愛知県がんセンター(研究所), がん標的治療TR分野, 主任研究員 (30833842)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: FGFR2 shRNA

Outline of Annual Research Achievements

FGFR2遺伝子増幅胃癌細胞(kato3, snu16)におけるFGFR2C3のsilencingの有効性がin vitroで確認できたため、in vivo mouse modelにおいても、FGFR2C3のsilencingが有効であることを確認することを目的にドキシサイクリン誘導shRNAの作成を試みた。当初FGFR2C3上の同定した配列を標的とするshRNA用のoligoをT4クローニングを用いてligationすることでshRNAの作成を行なっていたが、shRNAプラスミドを有するコロニーが確認できないことが継続したため、外部委託でshRNAを作成してもらう方針とした。しかしながらそれについてもドキシサイクリン誘導によるFGFR2C3のノックダウンが確認できなかった。同shRNAはGFPマーカーがあるため、セルソーターを用いてGFP高発現クローンを採取し、再度ノックダウンを確認したがドキシサイクリン誘導によるFGFR2C3のノックダウンは現時点で確認できていない状況である。現在異なるベクターであるpLKO1vectorを用いたshRNAの作成をligationの方法も含め各種検討を行っているところである。今後もshRNAの作成が困難な状況が続くのであれば、直接in vivo siRNAなどを用いて皮下腫瘍モデルを用いたin vivoでの効果を確認することも検討している。in vivoでの効果が確認できたらPDXなどを用いた解析にも取り組んでいきたい。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

他の研究課題へのエフォートが予想以上に高くなっており、本研究課題へのエフォートが申請時と比較して割けていないため。

Strategy for Future Research Activity

今年度は本研究課題へかけるエフォートが申請時と同程度までに回復しているため、遅滞がないよう研究課題を推進していく。今後もshRNAの作成が困難な状況が続くのであれば、直接in vivo siRNAなどを用いて皮下腫瘍モデルを用いたin vivoでの効果を確認することも検討している。

Causes of Carryover

他研究課題へのエフォートが予想以上に高くなり、本研究課題へのエフォートが申請時と比較し低くなってしまったため。今年度は今後もshRNAの作成が困難な状況が続くのであれば、直接in vivo siRNAなどを用いて皮下腫瘍モデルを用いたin vivoでの効果を確認することも検討しているため、そのために研究費を使用したい。