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2019 Fiscal Year Research-status Report

末梢血中核酸を用いたゲノム統合解析による難治性肝癌の治療反応機構の解明

Research Project

Project/Area Number 19K17392
Research InstitutionTokyo Medical and Dental University

Principal Investigator

村川 美也子  東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助教 (20733851)

Project Period (FY) 2019-04-01 – 2021-03-31
Keywords肝細胞癌 / cell free DNA
Outline of Annual Research Achievements

研究者らは、これまで確立してきた肝癌ゲノム変異プロファイルと背景疾患の関連についての研究成果、学術的基盤をもとに、非ウイルス性またはウイルス制御下における肝発癌の機序、進展過程、治療反応性に関わる癌ゲノム要因や分子機構の解明を目標として今年度の研究を行い、下記の成果を得た。
まず、ウイルス制御下における発癌の臨床的特徴を明らかにするためHBV症例におけるデータベース解析を継続し、核酸アナログ治療下における肝発癌予測に治療開始後早期のFIB-4 indexの変動が有用であるとの結果が得られ、ウイルス制御下のB型肝癌の発癌機序には初期のHBVゲノム組み込みだけでなく炎症・線維化の影響やそれに起因するゲノム変異が寄与している可能性が示唆された。
(1)血漿中cfDNA、cfRNA、exosomeを用いた癌関連遺伝子変異の探索:肝癌患者血漿をのべ75検体採取し、cfDNAの抽出を行った。cfDNA中に癌由来DNAが含まれることの検証のため手術症例でTERT promoter mutationの変異を解析、手術組織検体との比較検討を行い、腫瘍量とcfDNA中の変異copy数の相関が確認できた。
(3)全身化学療法導入症例における治療反応性に関わる経時的遺伝要因の同定:全身化学療法(分子標的薬)施行例において、経時的な血漿・cfDNAサンプルの収集を続けている。また、それらの症例における治療効果や経過に関わる臨床因子の解析を行ったところ、6割の症例でHCC結節の造影効果減弱を認めたもののそれに関わる臨床因子は抽出されず、腫瘍の遺伝的背景の解析の必要性が改めて確認された。

Current Status of Research Progress
Current Status of Research Progress

2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.

Reason

研究の基盤となる臨床的側面を確立するためにウイルス制御下における肝発癌の特徴を解析し、その中で明らかとなった新規の発癌予測因子についてInternational Liver Congress 2019(ヨーロッパ肝臓学会)、第55回日本肝臓学会総会シンポジウムで発表し、現在論文投稿準備中である。
また、(1)血漿中cfDNA、cfRNA、exosomeを用いた癌関連遺伝子変異の探索のため、当初の予定通り肝癌患者より癌手術検体とのペア血漿およびTACEや全身化学療法治療開始後の経時的血漿の採取を行い、DNA抽出・解析を行うとともに(2)HCCの病因と病態に関連する血漿中遺伝要因の解明に向けて臨床データの収集を進めている。
以上より、核酸の網羅的解析を行うための試料準備は整い条件検討を進めている段階であるが、cfDNA濃度や変異コピー数が低値であるため、cancer panelやwhole exome sequenceに際して技術的な修正、検討が必要になっている。実験条件や遺伝子変異解析方法の変更により解決可能と見込んでおり、実験系の構築を進めている。

Strategy for Future Research Activity

前項に記した(1)、(2)については今年度の実績に基づきさらにこれを継続して発展させて遂行する。
(3)全身化学療法導入症例における治療反応性に関わる経時的遺伝要因の同定:分子標的薬治療例数を更に増やしつつ、各薬剤の腫瘍血流減弱に関わる癌ゲノム変異クローンの同定を目指す。また、DNAプロファイル解析に難航する場合は、血漿と同時に取得している血清中蛋白の網羅的解析により薬物治療反応性と関わるバイオマーカーを探索する。2020年度中には肝細胞癌に対する免疫チェックポイント阻害薬の承認も見込まれており、導入症例には同様の手法で解析を行う。
(4)探索された遺伝要因のヒトiPS細胞を用いた機能解析:当研究室におけるCRISPR/CAS9 systemを用いたヒトiPS 細胞由来肝細胞への変異導入技術は更に向上しており、基礎的検討を行う基盤は整っている。

Causes of Carryover

理由:試薬等が計画当初より廉価で購入可能であったため。
使用計画:検討する数・種類を拡大して解析を行うため、試薬を増量して購入する予定である。

  • Research Products

    (18 results)

All 2020 2019

All Journal Article (6 results) (of which Peer Reviewed: 5 results,  Open Access: 5 results) Presentation (12 results) (of which Int'l Joint Research: 3 results)

  • [Journal Article] Vasoactive Intestinal Peptide Derived From Liver Mesenchymal Cells Mediates Tight Junction Assembly in Mouse Intrahepatic Bile Ducts.2020

    • Author(s)
      Sato A, Kakinuma S, Miyoshi M, Kamiya A, Tsunoda T, Kaneko S, Tsuchiya J, Shimizu T, Takeichi E, Nitta S, Kawai-Kitahata F, Murakawa M, Itsui Y, Nakagawa M, Azuma S, Koshikawa N, Seiki M, Nakauchi H, Asahina Y, Watanabe M.
    • Journal Title

      Hepatology Communications

      Volume: 4 Pages: 235-254

    • DOI

      10.1002/hep4.1459

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Association of serum interferon-λ3 levels with hepatocarcinogenesis in chronic hepatitis C patients treated with direct-acting antiviral agents.2019

    • Author(s)
      Inoue-Shinomiya E, Murakawa M, Asahina Y, Nakagawa M, Tsuchiya J, Sato A, Tsunoda T, Miyoshi M, Nitta S, Kawai-Kitahata F, Itsui Y, Azuma S, Kakinuma S, Murata K, Mizokami M, Watanabe M.
    • Journal Title

      Hepatology Reserch

      Volume: 49 Pages: 500-511

    • DOI

      10.1111/hepr.13307

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Loss of fibrocystin promotes interleukin-8-dependent proliferation and CTGF production of biliary epithelium.2019

    • Author(s)
      Tsunoda T, Kakinuma S, Miyoshi M, Kamiya A, Kaneko S, Sato A, Tsuchiya J, Nitta S, Kawai-Kitahata F, Murakawa M, Itsui Y, Nakagawa M, Azuma S, Sogo T, Komatsu H, Mukouchi R, Inui A, Fujisawa T, Nakauchi H, Asahina Y, Watanabe M.
    • Journal Title

      Journal of Hepatology

      Volume: 71 Pages: 143-152

    • DOI

      10.1016/j.jhep.2019.02.024.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Impact of novel NS5A resistance-associated substitutions of hepatitis C virus detected in treatment-experienced patients.2019

    • Author(s)
      Nitta S, Asahina Y, Kato T, Tsuchiya J, Inoue-Shinomiya E, Sato A, Tsunoda T, Miyoshi M, Kawai-Kitahata F, Murakawa M, Itsui Y, Nakagawa M, Azuma S, Kakinuma S, Hikita H, Takehara T, Watanabe M.
    • Journal Title

      Scientific Reports

      Volume: - Pages: -

    • DOI

      10.1038/s41598-019-42114-z.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Comprehensive genetic analysis of cholangiolocellular carcinoma with a coexistent hepatocellular carcinoma-like area and metachronous hepatocellular carcinoma.2019

    • Author(s)
      Kawai-Kitahata F, Asahina Y, Kaneko S, Tsuchiya J, Sato A, Miyoshi M, Tsunoda T, Inoue-Shinomiya E, Murakawa M, Nitta S, Itsui Y, Nakagawa M, Azuma S, Kakinuma S, Tanabe M, Sugawara E, Takemoto A, Ojima H, Sakamoto M, Muraoka M, Takano S, Maekawa S, Enomoto N, Watanabe M.
    • Journal Title

      Hepatology Reserch

      Volume: 49 Pages: 1466-1474

    • DOI

      10.1111/hepr.13403.

    • Peer Reviewed / Open Access
  • [Journal Article] Post SVRにおけるM2BPGiの意義2019

    • Author(s)
      中川美奈、村川美也子、朝比奈靖浩
    • Journal Title

      肝胆膵 特集/Post SVR時代のC型肝炎診療

      Volume: 78-4 Pages: 607-614

  • [Presentation] The association of serum IFN-λ3 levels with liver fibrosis and hepatocarcinogenesis in chronic hepatitis C patients treated with direct-acting antiviral agents2019

    • Author(s)
      Miyako Murakawa, Emi Inoue-Shinomiya, Yasuhiro Asahina, Mina Nakagawa, Jun Tsuchiya, Ayako Sato, Masato Miyoshi, Tomoyuki Tsunoda, Fukiko Kawai-Kitahata, Sayuri Nitta, Yasuhiro Itsui, Sei Kakinuma, Seishin Azuma, Mamoru Watanabe
    • Organizer
      EASL The International Liver Congress 2019
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] 核酸アナログ治療中および非治療のB型慢性肝疾患症例における発癌寄与因子の解析2019

    • Author(s)
      村川美也子、朝比奈靖浩、渡辺守
    • Organizer
      第55回日本肝臓学会総会
  • [Presentation] C型慢性肝疾患におけるSVR後発癌とIFN-λ3の関連2019

    • Author(s)
      村川美也子、四宮恵美、朝比奈靖浩、中川美奈、土屋淳、佐藤綾子、三好正人、角田正之、北畑富貴子、新田沙由梨、井津井康浩、東正新、柿沼晴、渡辺守
    • Organizer
      第55回日本肝臓学会総会
  • [Presentation] B型肝炎ウイルスキャリアにおけるHBs抗原陰性化および発がんに関わる臨床因子の検討2019

    • Author(s)
      村川美也子、中川美奈、土屋淳、佐藤綾子、三好正人、北畑富貴子、新田沙由梨、井津井康浩、東正新、柿沼晴、朝比奈靖浩
    • Organizer
      JDDW2019 第23回日本肝臓学会大会
  • [Presentation] 核酸アナログによるウイルス制御下のB型慢性肝疾患にお ける発癌寄与因子の検討2019

    • Author(s)
      村川美也子、朝比奈靖浩、渡辺守
    • Organizer
      第55回日本肝癌研究会
  • [Presentation] Impact of HCV clearance on HCC development and patient survival: Propensity score-matched analysis of an ongoing database of 2173 CHC2019

    • Author(s)
      Mina Nakagawa, Yasuhiro Asahina, Jun Tsuchiya, Ayako Sato, Tomoyuki Tsunoda, Msato Miyosh, Emi Inoue, Fukiko Kawai-Kitahata, MIyako Murakawa, Sayuri Nitta, Yasuhiro Itsui, Seishin Azuma, Sei Kakinuma, Makoto Tomita, Mamoru Watanabe
    • Organizer
      EASL The International Liver Congress 2019
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] C型肝炎ウイルス排除後の肝発がんに関わるリスク因子と病態の解析2019

    • Author(s)
      朝比奈靖浩、村川美也子、中川美奈
    • Organizer
      第55回日本肝臓学会総会
  • [Presentation] 背景肝の線維化からみた肝細胞癌における癌関連遺伝子変異とviral integrationの検討2019

    • Author(s)
      北畑富貴子、朝比奈靖浩、村川美也子、新田沙由梨、柿沼晴、角田知之 、三好正人、四宮恵美、佐藤綾子、土屋淳、井津井康浩、中川美奈、 東正新、田中真二、田邉稔、前川伸哉、榎本信幸、渡辺守
    • Organizer
      第55回日本肝臓学会総会
  • [Presentation] ウイルス制御下における肝発癌および長期予後―前向きコホートを用いたIFNベース治療とIFNフリー治療の比較検討―2019

    • Author(s)
      中川美奈、朝比奈靖浩、村川美也子
    • Organizer
      第55回日本肝臓学会総会
  • [Presentation] 細胆管細胞癌内の異なる表現型及び肝細胞癌における癌関連遺伝子の網羅的解析2019

    • Author(s)
      北畑富貴子、朝比奈靖浩、金子 俊、村川美也子、新田沙由梨、柿沼 晴、 三好正人、佐藤綾子、井津井康浩、中川美奈、東 正新、田邉 稔、菅原江美子、竹本 暁、坂元亨宇、尾島英知、村岡 優、前川伸哉 、榎本信幸 、渡辺 守
    • Organizer
      第55回日本肝癌研究会
  • [Presentation] Comprehensive analysis of cancer gene mutations and viral integration in hepatocellular carcinoma arising from non-fibrotic liver2019

    • Author(s)
      Yasuhiro Asahina, Fukiko Kawai-Kitahata, Miyako Murakawa, Sayuri Nitta, Yasuhiro Itsui, Mina Nakagawa, Seishin Azuma, Sei Kakinuma
    • Organizer
      AASLD The Liver Meeting 2019
    • Int'l Joint Research
  • [Presentation] C型慢性肝疾患DAA治療後の肝発癌および生命予後の検討2019

    • Author(s)
      中川美奈、村川美也子、朝比奈靖浩
    • Organizer
      JDDW2019 第23回日本肝臓学会大会

URL: 

Published: 2021-01-27  

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