2019 Fiscal Year Research-status Report
MSS大腸癌におけるNKcell耐性獲得のメカニズム解明
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19K17478
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| Research Institution | The University of Tokyo |
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Principal Investigator |
鈴木 伸三 東京大学, 医学部附属病院, 特任臨床医 (30723746)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | 大腸がん / オルガノイド / NKcell |
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| Outline of Annual Research Achievements |
本研究では、NKcellのMSS大腸がん、非MSS大腸がんに対する作用の相違を検討するため、まずCRISPR/Cas9による遺伝子編集にて、MSS大腸がんを模倣するAKP: (Apc-KO; Kras G12D; p53-KO)株のマウス大腸オルガノイド、非MSS大腸がんとしてΔTRIZI:(Braf V599E; Tgfbr2-KO; RNF43-KO; ZNRF3-KO, p16-KO)を樹脂した。磁気ビーズにてsortしたWTマウス由来のNKcellと共培養したところAKP株はNKcellに貪食される像が観察されたが、ΔTRIZI株では観察されなかった。
編集過程のAKオルガノイド株と、ΔTRIZオルガノイド株をRNAseqにて発現解析したところ、MHC-1の構成遺伝子群がAKオルガノイド株で低下する傾向があることが、判明した。
その結果を検証するため、MHC-1の発現の差をFACSにて検討したところ、AKP株の方がMHC-1の発現が低下していた。
また、NKcellの接合誘導にかかわるとされる他のKIR recepter関連遺伝子群の発現をqPCRにて検討したが、NKcellへの反応性の違いに結びつくような結果は得られなかった。
そのことから、MSS大腸がん、非MSS大腸がんを模倣した癌化オルガノイドのNKcellに対する反応性の違いは、MHC-1の発現に依存しているものと推察された。
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
CRISPR/Cas9による遺伝子編集に成功し、MSS、非MSS大腸がんモデルとなる癌化オルガノイドの作成に成功した。
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| Strategy for Future Research Activity |
MSS大腸がんオルガノイド株と、非MSS株でMHC-1の発現差の原因と探るため、MSS大腸がん株をさらに、CRISPR/Cas9による遺伝子編集を重ね、MHC-1の発現が回復する原因遺伝子を探索する。
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| Causes of Carryover |
研究の進捗により費用がかさむマウス実験が未終了であり、それに関する請求が次年度に繰り越されたため、次年度に支払い予定である。
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[Journal Article] Genetic editing of colonic organoids provides a molecularly distinct and orthotopic preclinical model of serrated carcinogenesis.2019
Author(s)
Lannagan TRM, Lee YK, Wang T, Roper J, Bettington ML, Fennell L, Vrbanac L, Jonavicius L, Somashekar R, Gieniec K, Yang M, Ng JQ, Suzuki N, Ichinose M, Wright JA, Kobayashi H, Putoczki TL, Hayakawa Y, Leedham SJ......Mukherjee S, Tejpar S, Leggett BA, Whitehall VLJ, Worthley DL, Woods SL.
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Journal Title
GUT
Volume: 68(4)
Pages: 684-692
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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[Journal Article] Mutant IDH1 confers resistance to energy stress in normal biliary cells through PFKP-induced aerobic glycolysis and AMPK activation.2019
Author(s)
Fujiwara H, Tateishi K, Misumi K, Hayashi A, Igarashi K, Kato H, Nakatsuka T, Suzuki N, Yamamoto K, Kudo Y, Hayakawa Y, Nakagawa H, Tanaka Y, Ijichi H, Kogure H, Nakai Y, Isayama H, Hasegawa K, Fukayama M, Soga T, Koike K.
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Journal Title
Sci Rep.
Volume: 11;9(1)
Pages: 18859
DOI
Peer Reviewed / Open Access
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[Journal Article] Alpha-Blockers As Colorectal Cancer Chemopreventive: Findings from a Case-Control Study, Human Cell Cultures, and In Vivo Preclinical Testing.8 Alpha-Blockers As Colorectal Cancer Chemopreventive: Findings from a Case-Control Study, Human Cell Cultures, and In Vivo Preclinical Testing.2019
Author(s)
Suzuki N, Niikura R, Ihara S, Hikiba Y, Kinoshita H, Higashishima N, Hayakawa Y, Yamada A, Hirata Y, Nakata R, Okamoto M, Sano M, Kushiyama A, Ichinose M, Woods SL, Worthley D, Iwamoto Y, Koike K.
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Journal Title
Cancer Prev Res (Phila)
Volume: 12(3)
Pages: 185-194
DOI
Peer Reviewed / Int'l Joint Research
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