2019 Fiscal Year Research-status Report
ケトン体であるβヒドロキシ酪酸を利用した慢性腎臓病の新規治療の開発
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19K17735
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| Research Institution | University of Fukui |
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Principal Investigator |
小林 麻美子 福井大学, 学術研究院医学系部門(附属病院部), 医員 (30791991)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2022-03-31
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| Keywords | βヒドロキシ酪酸 / シスプラチン腎症 |
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| Outline of Annual Research Achievements |
課題①ヒト培養尿細管細胞（HRCE)におけるケトン体であるβOHBによる腎保護効果の分子機序の解明：βOHBの細胞保護効果の機序として，①7回膜貫通型G蛋白共役型受容体であるGPR41/GPR109Aを介する経路，②内因性HDAC阻害作用による経路，③細胞内ATP産生の増強によるenergy stressの改善による経路などが考えた．①に関しては，βOHBは急性腎不全モデルであるcisplatin誘導性のcleaved caspase3を予備試験同様に有意に抑制したが，GPR109AのsiRNAを行った環境では，βOHBの作用を抑制することは出来なった．一方，②に関しては，HDAC1-8の発現を確認した．③のATPに関しては，βOHBでATP産生が濃度依存性の増加し，cisplatin投与で低下したATPがβOHBで上昇することを確認した．
課題②急性腎障害モデルマウスによるβOHBの腎保護効果の検証：8週齢の正常C57BL/6マウスを25mg/kgのcisplatinを腹腔内投与群と生理食塩水を投与する2群に分ける．その後，それぞれをさらに連日生理食塩水を腹腔内投与する群と，βOHBを投与する2群にわけ，投与3日後のこれら4群の24時間蓄尿で蛋白尿の変化，採血で血清Cr，BUN値の変化を確認し，cisplatin投与群に対し，cisplatin+βOHB群で腎機能が改善することを確認した．
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| Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
課題①に関しては，現時点では，βOHBが腎保護に作用する事は，培養細胞を用いたAKIモデルで確認出来た．しかし，現時点ではその作用点を見出せなかった．課題②マウスの実験でAKIモデルにおいて，Cr，BUNの有意な改善を確認出来た．それゆえ，概ね順調な経過と判断している．
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| Strategy for Future Research Activity |
2020年の目標としては，急性腎障害モデルマウスでのβOHBによる腎保護効果の分子機構の解明を中心にする．得られた腎組織からcDNAを作成し，同時にタンパク質も抽出する．cDNAを用いて，炎症，アポトーシスに関わるIL-6，IL-1b，TNF-α，VEGF-C，VEGF-A，Bcl-2, BaxのmRNA発現をreal-time PCRで解析する．また，抽出タンパク質を用いて， caspase-3,caspase-8, caspase-9, caspase-12, Bcl-2, Bax, p53の変化を各群でウエスタンブロッティング法により確認する．
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