2020 Fiscal Year Annual Research Report
プリン作動性化学伝達による非アルコール性脂肪肝炎（NASH）発症制御機構の解明
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19K17988
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| Research Institution | Kyushu University |
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Principal Investigator |
坂本 昌平 九州大学, 大学病院, 特別教員 (90761502)
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| Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2021-03-31
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| Keywords | VNUT / プリン作動性化学伝達 / NASH |
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| Outline of Annual Research Achievements |
各マウスより採取した骨髄前駆細胞にL929細胞培養上清を添加・培養し、骨髄由来マクロファージ（BMDM）に分化誘導し、以下の実験に用いた。VNUT欠損BMDMへLPS添加3時間後および6時間後に炎症性サイトカインの発現をリアルタイムPCR法にて解析した。VNUT欠損BMDMでは野生型と比較して、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12A、IL-12Bの発現が有意に低下していた。発現が低下していたサイトカインはTNF-αを除き、ATPの添加により、ATP濃度依存的に発現が増加した。以上の結果からBMDMにおけるVNUTはATP分泌を介して、オートクラインにより炎症を誘導していることが示唆された。
また、個体レベルの検討として、長期間のHFD負荷により野生型マウスの肝臓では炎症・線維化などのNASH様変化がみられたが、VNUT欠損マウスの肝臓では炎症・線維化が有意に抑制され、炎症性サイトカインの発現も低下していた。一方でウエスタンダイエット摂餌12週後では、肝臓で有意な炎症を認めなかったため評価が困難であった。そこでより早期に解析を行うため、NASHモデルマウスであるMC4R欠損マウスを用いることとした。VNUT欠損マウスは全身でVNUTを欠損したマウスであることから、NASH発症過程で炎症を惹起する細胞外ATPを分泌する細胞を同定するため、骨髄移植実験を行った。予備実験において野生型マウスにGFPマウスの骨髄を移植した際の骨髄細胞におけるGFP陽性率は92.6 %であった。上記のように野生型マウスがNASHを発症するには長期間の食餌負荷が必要なため、NASHモデルマウスであるMC4R欠損マウスおよび野生型マウスへVNUT欠損マウスおよび野生型マウス由来の骨髄を移植した。現在移植後4週であり、引き続き解析を継続する。
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