Prognosis prediction after resection of colorectal cancer liver metastasis by telomere measurement in the preoperative liquid biopsy.

2021 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K18133
• Research Institution: Nippon Medical School
• Principal Investigator: 青木 悠人 日本医科大学, 医学部, 助教 (40763256)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2023-03-31
• Keywords: テロメレース / テロメア長 / TERT活性 / PCR法 / 大腸癌肝転移

Outline of Annual Research Achievements

大腸癌肝転移の外科切除症例において、単発の小さな肝転移でも、早期に再発し不幸な転機をとる患者がいる一方で、多数の転移を認めても、手術で肝転移を取り除くことで、大腸癌が治癒する患者が存在する。しかし、術前より予後を予測することは困難である。本研究は肝転移切除術後の予後を予測するために、癌細胞のテロメア長やテロメレース活性が利用できないかを検討し、さらにliquid biopsyへの応用に挑戦するものである。
実施初年度は大腸がん肝転移症切除例の切除標本検体・採血サンプルを収集を開始した。切除標本を用いたものとしては、予備実験として既存の切除標本サンプルからPCR法にてテロメア長およびTERT活性を測定する予備実験を行い、測定方法をほを確立した。
移動やコロナ禍により遅れは出ているものの、順調に切除標本を集積でき、また随時RNAの抽出作業を行い、問題なく抽出的ることを確認した。現在10例ほどRNAの抽出作業を終え、今後PCRを行なっていく予定である。
また、liquid biopsyでのテロメア長ならびにTERT活性に関しては、採血中より分離した血中遊離癌細胞に白血球がコンタミネーションしてしまうことが問題となるため、その精度を高める方法を引き続き模索中である。抽出効率を向上させる必要があるが、single cellでの測定の可能性なども含め模索している。
今年度は集積したさらなるサンプルの蓄積を進めると共に、PCR解析を随時行なっていく。

Current Status of Research Progress

4: Progress in research has been delayed.

Reason

2020年4月より学内で異動があり、都内から千葉県の分院に異動となった。異動先で再度倫理委員会承認やサンプルの保管場所の確保後にサンプル（切除標本）の集積を開始したため、サンプルの集積に半年ほど遅れが出た。
また、新型コロナ蔓延により、都内にある協力研究機関との行き来ができない時期が長期に渡った。しかし、サンプル集積は順調に行えてきており、また協力機関との往来も昨年後半より改善された。今後は解析作業を進めていく。

Strategy for Future Research Activity

切除標本を用いた検討に関しては、サンプルの集積は現在順調に行えており、またRNAの抽出作業も順調に進んできている。今後はPCR法によるテロメア長・TERT活性の測定を行っていく。
また、採血を用いたliquid biopsyによる測定は、引き続きコンタミネーションの影響を排除する方法を模索し、測定方法を確立し次第解析を行いたい。

Causes of Carryover

PCRの実施が遅れており、その試薬の購入が遅れている。またまだ学会発表・論文発表できるところに至っておらず、その分で計上した経費を使用しなかった。

よって、計画の進行と共に次年度以降に使用する予定である。