2019 Fiscal Year Research-status Report
Elucidation of molecular mechanism of anti-inflammatory effects of intravenous anesthetic agents
Project/Area Number |
19K18280
|
Research Institution | Juntendo University |
Principal Investigator |
河内山 宰 順天堂大学, 医学部, 助教 (30821722)
|
Project Period (FY) |
2019-04-01 – 2023-03-31
|
Keywords | プロポフォール / マクロファージ / 静脈麻酔薬 / GABAa受容体 / THP-1 |
Outline of Annual Research Achievements |
申請者は、これまでにマクロファージをM1(炎症性マクロファージ)分化誘導時にプロポフォールを添加することで炎症性サイトカイン産生を抑制することを示している。炎症性サイトカイン産生の抑制の機序解明を目的として、GABAa受容体のサブタイプの遺伝子発現変化を解析し、明らかにした。 GABAa受容体は、19種類のサブタイプのうち5つから成り立つ5量体のイオンチャネル型受容体である。その中で、多く発現されているα、β、γのサブタイプの発現を解析することとした。 ヒト急性単球性白血病細胞株(THP-1)を使用して実験を行った。THP-1をPhorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)刺激し①マクロファージへ分化させ、②このマクロファージを用いてM1分化させた。③M1分化時にプロポフォールを添加し培養した。①~③の各細胞のGABAa受容体サブタイプのmRNA発現をRT-PCR法で解析した。①マクロファージ分化、②M1分化、③M1分化時のプロポフォールによるGABAa受容体サブタイプへの効果・影響を遺伝子発現変化で検討した。 ①ではGABAa受容体サブタイプのα1、α4、β1、β2、γ1、γ2のmRNAが有意に増加した。②ではα1、α4、β1、β2、γ2のmRNA発現は有意に抑制された。③ではα1、α4、β2のmRNA発現が増加傾向であった。 THP-1においてマクロファージ分化、M1分化によってGABAa受容体サブタイプのmRNA発現は有意に増減した。さらにプロポフォールを投与することで、炎症に関連性の強いα1、α4とプロポフォールの作用部位とされるβ2の発現が増加した。従って、GABAa受容体サブタイプの発現変動がプロポフォールの持つ抗炎症効果の一端を担っている可能性が考えられた。
|
Current Status of Research Progress |
Current Status of Research Progress
2: Research has progressed on the whole more than it was originally planned.
Reason
申請者が今まで研究していた場所ではなく、新しい施設で行っている研究であることと大学院生時代と違い、研究日が少ないため思ったように実験が出来なかったが、現在は、施設や設備に慣れてきたため実験のペースアップが出来てきている。今後、論文化を含め実験結果をまとめていく予定。
|
Strategy for Future Research Activity |
cell lineのTHP-1での各分化・プロポフォールのGABAa受容体サブタイプへの与える効果・影響を遺伝子発現変化にて解析した。次は、ヒト健常人ボランティアより末梢血を採取し末梢血由来の単球・マクロファージ・M1マクロファージにおいてGABAa受容体サブタイプの解析を行う予定である。mRNA解析が完了した後は、western blotやFACSでタンパクレベルでのGABAa受容体サブタイプの発現変動を解析する予定である。 また、実験結果が出次第、順次学会で研究成果を報告するとともに、論文化を同時並行して進める。
|
Causes of Carryover |
実験の経過で、試薬の購入を検討したが現在の残額では購入が中途半端になってしまうため次年度に繰り越し使用することとした。
|