多臓器不全におけるサイトケラチン７（CK7）陽性細胞の役割の解明

2022 Fiscal Year Research-status Report

• Project/Area Number: 19K18350
• Research Institution: Shiga University of Medical Science
• Principal Investigator: 加藤 文崇 滋賀医科大学, 医学部, 非常勤講師 (30837315)
• Project Period (FY): 2019-04-01 – 2024-03-31
• Keywords: 敗血症

Outline of Annual Research Achievements

計画に従い、令和元年より令和4年にかけて、病理献体標本におけるCK7陽性細胞の臓器発現の調査を行った。具体的には集中治療室入室患者の病理検体標本を用いて、全身の臓器標本に対しCK7に対する免疫染色を行い、陽性細胞の数、陽性管腔形成数を調査し、多臓器不全患者における臓器毎の発現数を非多臓器不全患者と比較した。また、死亡時の検査データと照合し、高ビリルビン血症、高アミラーゼ血症、高クレアチニン血症との相関関係につき調査を行った。
令和3年より令和4年にかけて、マウスにおけるCK7陽性細胞における骨髄由来細胞の関与の調査を行った。具体的には、GFP(Green Floroscent protein)トランスジェニックマウスの骨髄を、放射線照射した野生型マウスに移植した。その後上述のモデルを作製し、CK7陽性細胞の発生や、C7陽性管腔の形成における骨髄由来細胞の関与の有無を調査した。この実験により、多臓器不全にて生じる臓器構造の変化が、骨髄由来細胞の関与の有無につき判断できた。同時に、マウスにおけるCK7陽性管腔構造の異常性に関する調査を行った。具体的には、上述のマウスモデルにおいて、CK陽性管腔形成構造の状態を明らかにするために、肝臓、膵臓、腎臓に対し連続切片による免疫染色を行い、CK7陽性管腔形成を画像解析ソフトを用いて3D構築した。

Current Status of Research Progress

3: Progress in research has been slightly delayed.

Reason

マウスモデルにおけるCK陽性管腔形成構造の状態を明らかとするため、肝臓、膵臓、腎臓に対し連続切片による免疫染色を行い、画像解析ソフトを用いた３D構築にて調査を行っているが、解析に時間を要しているため。

Strategy for Future Research Activity

引き続き、集中治療室入室患者の病理検体標本を用いて、全身の臓器標本に対しCK7 に対する免疫染色を行い、陽性細胞の数、陽性管腔形成数を調査し、多臓器不全患者における臓器毎の発現数を非多臓器不全患者と比較する。また、死亡時の検査データと照合し、高ビリルビン血症、高アミラーゼ血症、高クレアチニン血症との相関関係につき調査を行う。この結果、ヒトにおけるCK7 陽性細胞の臓器不全への関与を明らかとなる。また、腹膜炎モデルマウス（CLP モデル）に対し、全身の臓器における、CK7 に対する免疫染色を行い、陽性細胞の数、陽性管腔形成数を調査し、ヒトと同様に多臓器不全の有無による発現数の違いを調査する。さらに、細胞障害を誘導する生理活性物質（腫瘍壊死因子等）、線維化を誘導する物質（トランスフォーミング増殖因子等）、細胞起源に関わる物質（CK19等）との共発現の有無を調査する。加えて、GFP(Green Floroscent protein)トランスジェニックマウスの骨髄を、放射線照射した野生型マウスに移植する。その後上述のモデルを作製し、CK7 陽性細胞の発生や、C7 陽性管腔の形成における骨髄由来細胞の関与の有無を調査する。上述のマウスモデルにおいて、CK 陽性管腔形成構造の状態を明らかにするために、肝臓、膵臓、腎臓に対し連続切片による免疫染色を行い、CK7 陽性管腔形成を画像解析ソフトを用いて3D 構築する。

Causes of Carryover

マウスモデルにおける肝臓、膵臓、腎臓に対し連続切片による免疫染色および、画像解析ソフトを用いた３D構築に時間がかかり、研究に遅れが生じている。次年度も引き続き動物購入、免疫染色等による実験を継続する必要があるため、次年度使用を必要とした。